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手足口标本采集技术方案 手足口标本采集技术方案 PAGE PAGE # / 249 / 24 附件 1 手足口病标本采集及检测技术方案 一、采集标本的种类、保存和运输 （一）粪便标本。 采集病人发病 3 日内的粪便标本，用于病原检测。粪便标本采集 量 5-8g/ 份 ，采集后立即放入无菌采便管内，外表贴上带有唯一识别 号码的标签，4C暂存12小时内送达实验室，-20 C以下低温冷冻保藏， 需长期保存的标本存于-70 C冰箱。 （二） 咽拭子标本。 采集病人发病 3 日内的咽拭子标本，用于病原检测。用专用采样 棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅 速将棉签放入装有 3-5ml 保存液（含 5%牛血清维持液或生理盐水，推 荐使用维持液）的 15ml 外螺旋盖采样管中， 在靠近顶端处折断棉签杆， 旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签。 4C 暂存并在12小时内送达实验室，-20 C以下低温冷冻保藏，需长期保 存的标本存于-70 C冰箱。 （三） 血清标本。 各省（区、市）在手足口病流行年份中均应采集 EV71 和 CVA16 感染的手足口病患儿的双份血清。采集急性期（发病 0-7d ）和恢复 期（发病14-30d ）双份配对血清用于阐明和分析 EV71和CVA16感染 后 IgG 和 IgM 抗体的动态变化， 评价血清学抗体试剂盒的敏感性和特 异性。 静脉采集 3-5ml 全血，置于真空无菌采血管中，自凝后，分离 血清，将血清移到 2ml 外螺旋的血清保存管中， 外表贴上带有唯一识 别号码的标签。将血清置于-20 C以下冰箱中冷冻保存。 （四）疱疹液。 在手足口病的实验室诊断中， 从疱疹液中分离到病毒即可确诊该 病毒为病因，可同时采集多个疱疹作为一份标本。先用 75%的酒精对 疱疹周围的皮肤进行消毒， 然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹 液，迅速将棉签放入内装有 3-5ml 保存液（含 5%牛血清维持液或生 理盐水，推荐使用维持液）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆， 旋紧管盖并密封， 采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签。 所采集 标本4C暂存立即（12h内）送达实验室，—20 C以下低温冷冻保藏， 需长期保存的标本存于—70C冰箱。 （五） 肛拭子标本。 采集病人发病 3 日内的肛拭子标本， 用于病原检测。 用专用采样 棉签，从患儿肛门轻轻插入，适度用力弧型左右擦拭数下，拔出后 , 迅速将棉签放入装有3— 5ml保存液（含5%牛血清细胞维持液）的15ml 外螺旋的采样管中， 采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签。 在靠 近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖，并密封，以防干燥。 （六） 尸检标本。 采集脑、肺和肠淋巴结等重要组织标本，每一采集部位分别使用 单独的消毒器械。 每种组织应多部位取材， 每部位应取 2-3 份约 5-10g 的组织，淋巴结 2 个，分别置于 15ml-50ml 无菌的有外螺旋盖的冻存 管中，采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签。 （七） 脑脊液标本。 出现神经系统症状的病例， 可采集脑脊液标本， 进行病毒分离或 核酸检测。采集时间为出现神经系统症状后 3 天内，采集量为 1.0-2.0mI。采集后立即装入无菌带垫圈的冻存管中， 4C暂存立即 (12h内)送达实验室，—20C以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本 存于—70C冰箱。但EV71感染神经系统时，很难在脑脊液中检测到 EV71病原。 临床标本在运输和贮存过程中要避免反复冻融。 标本采集后要全 程冷藏或冷冻保存和运输，12小时内送达实验室。依照《人间传染 的病原微生物名录》，肠道病毒或潜在含有肠道病毒的标本按 B类包 装，置于冷藏保存盒内运输，尽量缩短运输时间。可采用陆路或航空 等多种运输方式，但在运输过程中应采取保护措施，避免强烈震动、 重力挤压等现象。在送到省、地、市级 CDC实验室时，包装盒内应带 冰且包装完整。在上送标本的同时，需附带相关的 《手足口病病例临 床标本采样登记表》。 二、标本米集注意事项 在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中分离到病毒即 可诊断该病毒为病因。用于采集咽拭子的无菌拭子要放在标本保存液 中，如含5%牛血清维持液。用于分子生物学诊断的标本米集与病毒 分离标本的采集方法一样。为了保证检测结果的准确性和有效性， 标 本应在病例发病后尽早采集，尽快检测。不能立即检测的标本应冷冻 保存。对于血清学诊断，急性期血清应该在发病后尽早采集，恢复期 血清在发病两周后米集。标本保存液的配置见下表： 保存液 Eagles 液(MEM) 80.5ml 3%L谷氨酰胺 200mM 1.0ml 胎牛血清 5.0ml 7.5%NaHC溶液 3.5ml 青、链霉素 10ml （各 10000U/