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PEG 诱导细胞融合 李卓 王慧琴 杨佳慧 王钟秀 细胞融合 ? 自发条件下或人工诱导下，两个或两个 以上的同种基因型或异种基因型的细胞 融合成一个细胞的过程称为细胞融合， 也称细胞杂交。 ? 同种细胞能够自发融合，是机体重要的 生命活动，如有性生殖时配子的融合。 ? 异种细胞的融合必须经过诱导剂处理， 进行诱发融合。 细胞融合技术 ? 是指细胞通过诱导和培养，在离体条件下用人工 方法使不同种细胞发生膜融合、胞质融合和核融 合从而形成杂种细胞，使其同时具有两种细胞的 遗传和生物特性。 ? 常用的人工诱导方法包括：病毒诱导法、电刺激 法、聚乙二醇诱导法。 细胞融合发展史 1. 自然发生的细胞融合 早在 19 世纪人们就发现在自然条件下生 物界中有自发的细胞融合现象。 Muller 1838 年在肿瘤中观察到了多核细胞此后 在由病毒感染的病料组织中如天花脓疱的 周围、受水痘损害的皮肤、在麻疹病人的 扁桃体中陆续发现多核细胞这些多核细胞 可能是病毒作用的结果：但当时还没有人 认识到这一点。 1875 年 Lange 首先观察 到脊椎动物蛙类血液细胞合并，继之又有 一些研究者在无脊椎动物中也发现了融合 细胞。 2.PEG 作为促融剂引起的革命、 由于病毒诱导细胞融合存在着病毒制备困难、 操作复杂、灭活病毒的效价差异大等原因 , 科 学家们又尝试寻找比病毒简便、快速和高效 且比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用 方便的化学 PEG 加拿大华裔科学家高国楠等 ( 1974 年 ) 的研究取得重大突破他发现高分 子量的聚乙二醇 ( PEG) 在 Ca2 + 存在时能促 使植物原生质体融合显著提高融合率从而迅 速推动了原生质体技术的基础研究和应用研 究。至此应用原生质体和发展操纵它们的方 法已引起实验生物学的“无声革命”。 ? , ? 同时 , Pontecorvo ( 1975 年 ) 发现 PEG 能诱 导哺乳动物细胞融合并产生杂交细胞。 1976 年 Davidson 等对此作了进一步证实。 以后的研究工作表明 , PEG 不仅可以促使 植物、动物、微生物的细胞融合 , 而且还能 促使动物细胞与植物的原生质体发生融合 , 促使微生物原生质体与动物细胞融合 , 使植 物原生质体摄入微生物。 1975 年 Ahkono 报道用 PEG 将母鸡的红血球细胞和酵母菌 的原生质体融合成功 1976 年 Dudus 等报道 人的细胞能和胡萝卜的原生质体发生融合。 Davey ( 1972 年 ) 和 Vasil( 1977 年 ) 用植物 原生质体摄取了细菌细胞。 ? 1975 年，在动物体细胞杂交技术的基础上又 创立了淋巴细胞杂交瘤技术。同体细胞融合一 样 , 杂交瘤工作早期使用的促融剂——灭活的 仙台病毒 , 已逐渐为化学促融剂 PEG 所取代。 Davidson 等于 1976 年建立的以 PEG 诱发哺乳 类细胞融合的方法 , 也同样适用于淋巴细胞同 瘤细胞的融合。由于淋巴细胞杂交瘤技术能制 备纯度高、专一性强的抗体 , 适于由未纯化的 抗原大量制备 , 因而在短短几年时间里 , 即已被 广泛用于制备各种单克隆抗体。 PEG 诱导细胞融合 PEG 作用机制 ? 聚乙二醇（ PEG ）是乙二醇的多聚化合物，存在 一系列不同分子量的多聚体。 PEG 是一种特殊的 脱水剂，可与水借氢键结合，导致细胞脱水而发 生质膜结构的变化，使细胞相互接触部位的膜脂 双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重 排，再加上膜脂双层的相互亲和以及彼此间表面 张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互 合并在一起，使细胞的胞质沟通，从而造成相互 接触的细胞之间发生融合。 PEG 的最适使用条件 ? 细胞的融合效果与 PEG 的相对分子质量及其体积 分数成正比，但 PEG 的相对分子质量越大、体积 分数越高，对细胞的毒性也就越大。实验时常选 用 PEG 相对分子质量为 4000-6000 ，体积分数为 50% 时，细胞破碎较少，融合率较高。 其他影响细胞融合的因素 ? 钙离子可以使带微弱负电荷的 PEG 与细胞膜表面 分子相互作用，引起细胞膜表面电子分布的改变， 从而使接触处的质膜形成局部融合，出现凹陷， 构成原生质桥，成为细胞间通道并逐渐扩大，直 到两个细胞全部融合。当钙离子浓度为 50mmol/ml 时，融合效果最好。 实验结果 ： 观察到两个或多个 细胞发生质膜融合 但核尚未融合，有 的则是细胞间不仅 发生质膜融合，而 且细胞核也发生了 融合。 刚开始融合 开始进行核融合 分析讨论 ? 聚乙二醇分子能改变各类细胞的生物膜结构，使 两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组， 使细胞发生融合，形成融合细胞。本次实验用聚 乙二