RNAi沉默K-Ras基因对抑制食管癌EC9706细胞的生长并.doc

RNAi沉默K-Ras基因对抑制食管癌EC9706细胞的生长并 增强化疗敏感性的影响 王新杰1 郑玉玲2 樊青霞3 （1郑州大学第一附属医院中西医结合科 河南 郑州 450052 ;2河南中医学院 河南 郑州 450003；3郑州大学第一附属医院肿瘤科 河南 郑州 450052） 摘要 目的 研究RNAi沉默K-Ras基因后，对食管癌9706细胞的生长、增殖、凋亡、侵袭力及化疗敏感性的影响；方法 设计构建K-Ras基因的表达载体pSilencer-siK-ras，用脂质体方法转染EC9706细胞株，设六组：空白组（不转染）、阴性对照组(转染空载体)、实验组(转染pSilencer-siK-ras )、紫杉醇化疗组、紫杉醇化疗加空载体组、紫杉醇化疗加 pSilencer-siK-ras，分别采用RT-PCR、Westernblot、MTT、流式细胞仪、Transwell方法，检测细胞的K-Ras mRNA及蛋白的表达、细胞的生长、增殖、凋亡及侵袭情况；并评价对紫杉醇化疗增效作用。结果 K-Ras siRNA可明显下调EC9706细胞中K-Ras mRNA及蛋白表达水平，EC9706细胞生长受到明显抑制；转染pSilencer-siK-ras 后细胞生长受到明显抑制，流式细胞结果显示实验组细胞出现明显凋亡现象，且阻滞于G1期，细胞迁移能力明显下降。转染pSilencer-siK-ras或加入紫杉醇后，细胞均受到不同程度抑制，但两者协同时则抑制更明显；结论K-Ras siRNA 可下调EC9706 细胞中K-Ras的表达，使细胞生长增殖减慢，细胞周期停滞，凋亡率增加，细胞的体外侵袭明显下降，联合紫杉醇具有协同作用，提示RNAi沉默K-Ras具有食管癌化疗增敏效果。 关键词RNA干扰； K-Ras；食管癌； 紫杉醇；化疗敏感性。 Effects of inhibiting the growth of esophageal cell 9706 and enhancing chemotherapy sensitivity by RNA interference silencing K-Ras gene Wang xin-jie1, Zheng yu-ling2, Fan qing-xia3 (1The first affiliated hospital of zhengzhou university，zhengzhou 450052, henan,; 2Traditional Chinese Medicine of henan collage, zhengzhou 450003, henna 3The first affiliated hospital of zhengzhou university，zhengzhou 450052, henan,) Abstract Objective To study the effects of the growth,proliferation,apoptosis invasion of esophageal cell 9706 and enhancing chemotherapy sensitivity by RNA interference(RNAi) silencing K-Ras gene. Methods Design and construct the pSilencer-siK-ras. transfect into EC9706 cells by lipofectamine. Design the six groups of cells control-siRNA, psilencer-siK-ras, cell+taxol, control-siRNA +taxol,psilencer-siK-ras+taxol.Examining the expression of KRas protein. the growth proliferation apoptosis invasion of esophageal cell 9706 by RT-PCR. Westernblot. MTT. Flow cytometry Transwell. And appraising the effect for taxol.Results K-Ras siRNA knockeddown K-Ras mRNA expression in EC9706 cells obviously,the growth was inhibited obviously after psilencer-siK-ras, and promoted cell apoptosis, arrested the