实验一检测生物组织中的糖类脂肪蛋白质.docxVIP

实验?检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质 一、实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 50～65℃水浴 颜色反应:?还原糖+斐林试剂 砖红色沉淀 淀粉?+碘液 蓝色 脂肪?+苏丹Ⅲ/Ⅳ 橘黄色/红色 蛋白质+双缩脲试剂 紫色络合物 二、实验步骤： 1、检测还原糖 待测样液?2ml 斐林?1ml（甲液和乙液混合） 50?～?65?℃水浴加热 观 察 2、检测脂肪 花生子叶薄片?1?片 染色?2min（苏丹Ⅲ染液） 洗浮色（50%酒精） 观 察 3、检测蛋白质 待测样液?2ml 双缩脲?A?液?1ml 双缩脲?B?液?4?滴 观 察 4、检测淀粉 待测样液?2ml 葡萄糖酸??+?Cu? 葡萄糖酸??+?Cu?2O↓（砖红色）+?H?2O 观 察 注意事项： 还原糖的检测和观察： ①还原糖有葡萄糖，果糖，麦芽糖； ②甲乙液必须等量混合均匀后再加入样液中，现配现用； ③必须用水浴加热 脂肪的鉴定： ①切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰，有的地方模糊。 ②酒精的作用是：洗去浮色 ③需使用显微镜观察 ④使用不同的染色剂染色时间不同 蛋白质的鉴定： ①先加?A?液?1ml，再加?B?液?4?滴 ②鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比 资料一：生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。 前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗?糖分 子内没有，为非还原糖。?可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试 剂 发生作用，可生成砖红色的?Cu?2O?沉淀。如： 加热 葡萄糖?+?2Cu2+?+?4OH— 即?Cu?2+被还原成?Cu?2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色沉淀淀粉遇碘 变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。 资料二：脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分， 脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞 内。苏丹三染液其实是苏丹三固体颗粒溶于高浓度乙醇（70%-95%,多用?95%）配制而成的, 而脂肪同样较易溶于高浓度乙醇,所以染色时间长了就会让样品中的脂肪溶解,洗浮色的时 候被洗掉,就观察不到了。?在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以 及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹 黑及油红?O?等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。临床 上常对组织切片进行染色观察。 资料三：蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在 碱性?NaOH?溶液中能与双缩脲试剂中的?Cu2+作用，产生紫色反应。） 资料四：在实验中液体的材料可以直接利用，而有些固体的材料需经过处理后才能用于实验。 如苹果、萝卜、梨、西瓜等可以支撑匀浆过滤后利用。一种检测脂肪的方法：取少量生物组 织，制成临时装片，用苏丹Ⅲ后者苏丹Ⅳ染色后，用50%酒精洗去浮色，在高倍显微镜下观 察。这样即使生物组织中脂肪含量少，显色不明显也能观察到。