药学类骨干教师及基层药师培训 药品质量与安全专业带头人、骨干教师培训 LC-MS基础知识.pptx

;色谱－质谱联用成套仪器;内容;一、高效液相色谱仪;色谱的发明;1、什么是高效液相色谱;2、流程及主要部件 （process and main assembly of HPLC）;HPLC的仪器配置;高压输液泵 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。;梯度淋洗装置;进样装置;高效分离柱;HPLC检测器;b. 光电二极管阵列检测器;;光电二极管阵列检测器;c. 示差折光检测器（differential refractive index detector）;d. 荧光检测器（fluorescence detector）;E 蒸发光散射检测器-通用检测器;3.色谱相关术语色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）;分离度;对称因子计算示意图;塔板理论 ;塔板理论假定：;理论塔板数与标准差（峰宽或半峰宽）和保留时间的关系：;踏板理论的优缺点;速率理论;速率理论流动相线速度对塔板高度的影响 ;4 色谱新技术;未来的HPLC-nanoHPLC;柱子：整体柱，200um?5cm 流速：2.5uL/min 检测池：3nL 检测器：MS 进样浓度：500 fmol;柱子：整体柱，200um?1000mm 流速：0.7pL/min 检测池：3nL 检测器：MS（300-2000 m/z) 进样体积：1uL ;平行色谱;nanoHPLC;未来的HPLC-multidimensional HPLC;二、质谱分析法;质谱分析检测的是离子的质量;质量数的计算;天然同位素丰度;1、质谱仪与质谱分析原理mass spectrometer and mass spectrometry;2、离子源; 离子室内的反应气（甲烷等；10~100Pa，样品的103~105倍），电子（100~240eV）轰击，产生离子，再与试样分离碰撞，产生准分子离子。;在电子轰击下，甲烷首先被电离: CH4+e CH4+ + CH3+ + CH2+ + CH++ C+ + H2++ H++ne- 甲烷离子与分子进行反应，生成加合离子： CH4+ + CH4 CH5+ + CH3 CH3+ + CH4 C2H5+ + H2 加合离子与样品分子反应： CH5+ + XH XH2+ + CH4 C2H5+ + XH X+ +C2H6;场致电离源（FI）;基质辅助激光解析电离Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI);流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘； 气帘的作用：雾化；蒸发溶剂；阻止中性溶剂分子;Rayleigh Limit Reached;电喷雾电离;NanoESI source (left) and nanoESI emitter (right)?;大气压化学电离;APCI;Agilent 1100 LC/MSDAPCI Ion Source;API-ES vs. APCI for Triamterene;3. 质量分析器原理;双聚焦分析器;四极质量分析器 – 四极质谱计 ;离子漂移管-飞行时间质谱计（Time of Flight MS, TOFMS） ;飞行时间质量分析器;傅立叶变换质谱计 ; ?如果磁场强度（B）一定，改变射频场的频率（?） 即可激发不同m/z的离子而得到质谱。 ;傅立叶变换质谱计，中科院化学所（北京质谱中心）;离子阱质量分析器;双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector). 四极质谱仪(Q). 飞行时间质谱仪(TOF). 离子阱质谱仪（TRAP） 付利叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICR-MS). ┏四极+TOF（Q-TOF） 串列式多级质谱仪┫三重四极（QqQ） (MS/MS) ┗TOF+TOF ;串联MS/MS的仪器从原理上可分为两类;串联四极质谱仪(MS/MS) ： 三重四极（QqQ） 离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器 MS1 MS2 Q1 q2 Q3 ;样品导入;为什么需要MS/MS？;扫描模式 – Full Scan（全扫描）;扫描模式 – SIM（选择离子监控）;扫描模式 – SRM（选择反应监控）;扫描模式 – MRM（多级反应监控）;MRM 扫描方式的特点;4、质谱术语;质量色谱图;;;数学定义：;Mass measurement accuracy dep