CTAB法所需溶液配置.doc

CTAB法所需溶液配置 提取液的配置 1、1M Tris-Hcl（PH 7.5-8.0） 10ml 称121.1g Tris（三羟甲基氨基甲烷 分子量121.1）溶于800ml水中，搅拌条件下加入浓盐酸（PH调至7.5）。待接近所需PH时，用稀Hcl准确调PH值至所需值，加入重蒸水至总体积1L，分装，高压灭菌（温度为121℃，时间为30分钟）。 注：如调PH 7.4则大约加浓盐酸70ml，PH 7.6加60ml，PH8.0加42ml 2、5M Nacl 14ml 称292.2g Nacl，溶于800ml蒸馏水中，此时已接近饱和，所以溶解较慢，完全溶解后用蒸馏水定容至1L，分装，高压灭菌。 3、0.5M EDTA（PH 8.0）溶液 10ml 称186.1g EDTA-Na2?2H2O（冰乙二胺四乙酸二钠盐）加入800ml重蒸水，用磁力搅拌器搅拌，加入NaOH（10M）调PH至8.0（只有PH值约等于8.0时EDTA-Na2?2H2O才能完全溶解，待EDTA-Na2?2H2O完全溶解后，再用稀NaOH准确调PH=8.0），重蒸水定容至1L，灭菌。 调PH值：?用固体NaOH约20g左右 ?用10mol/L的NaOH溶液约70ml 10M NaOH的配置：称取40gNaOH溶于蒸馏水后定容至100ml 4、CTAB 1g 5、ddH2O 65ml 6、2M β-巯基乙醇 4℃ 保存 1ml 方法：1 、2、 3、4、 5加热溶解后加入6（ 即2M β-巯基乙醇 ） 氯仿/异戊醇（V/V=24：1）：贮于棕色瓶中 取氯仿480ml（即从一瓶中取出20ml），再在瓶中加入异戊醇20ml，摇匀 注：最好现配现用 RNase （10mg/ml） 称取100mg RNase溶于10ml 10mmol/LTris-cl（PH 7.5），15mmol/L Nacl中，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装后于-20℃保存。 25mg加2.5ml TE缓冲液，于100℃水浴，加热15min，缓慢冷却至室温，不要贴底，否则会产生絮状沉淀。 注：水浴锅达不到100℃，用电炉子放上闷罐，水多些，放帖底。 3） 用水溶解RNase，终浓度10mg/ml，煮沸20min，缓慢冷却，分装，于-20℃下保存。 TE（10mmol/L Tris 1mmol /L EDTA）：有7.4、7.6、8.0三种TE溶液 分别由1ml的PH7.4、7.6、8.0的1mol/LTris?cl缓冲液与0.2mlPH8.0的0.5mol/LEDTA溶液混合后，用重蒸水定容至100ml 异戊醇（5瓶 200份）：-20℃冰柜保存 70% 乙醇 70ml无水乙醇加30ml ddH2O