DH5α感受态细胞的使用说明及注意事项.pdfVIP

DH5 α感受态细胞的使用说明及注意事项 保 存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之 日起液氮保存至少一年， -70℃保存至少 6 个月。 产品简介： DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌 DH5 α菌株经特殊工艺制备得到，可用 于 DNA 的化学转化。使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 10 8 ，-70℃保 存 3-5 个月转化效率不发生改变。 基因型:supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1 特 点: 一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型 菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与 pUC 载体编码的 β-半乳糖苷 酶氨基端实现 β 互补，可用于蓝 白斑筛选。 操作方法： （以下操作均按无菌条件的标准进行） 1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意 目的 DNA 的体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物， 冰浴放置 30 分钟。 3、将离心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。 4、向离心管 中加入 500ul 无菌无抗 的 SOC 或 LB 培养基 ，37℃ 180rpm 振荡培养 1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌 体复苏。 5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板， 37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取 100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA 总量较 少，可取 200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预 计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个 平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将 剩下的菌液再涂布新的平板。 注意事项： 1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降 低。 2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为 以后的筛选、鉴定带来影响。 3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加 入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要 小于感受态细胞体积的十分之一。 4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。 5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损 失降到最低。