DB63∕T 1163-2012 牦牛体外受精胚胎生产技术操作规程(青海省).pdfVIP

TCS 65. 020. 30 B 43 备案号 35830-2013 DB63 同 主 巳 由 『 T 海 省 ， 目 万 标 准 DB 63/T 1163-2012 斗毛牛体外受精胚胎生产技术操作规程 2012 - 12 - 04 发布 2013 - 01 - 01 实施 青海省质量技术监督局 发布 DB63/T 1163--2012 目IJ 1=1 本规程依据GB!T 1.1-2009的规则编写。 本规程由青海省畜牧兽医科学院提出井归口。 本规程起草单位:青海省畜牧兽医科学院畜牧研究所。 本规程主要起草人:徐惊涛、孙永刚、才让东智、马志杰。 DB63/T 1163--2012 斗毛牛体外受精胚胎生产技术操作规程 1 范围 本规程规定了牛毛牛体外受精胚胎生产的术语和定义、牛毛牛卵母细胞分级、体外成熟、体外受精及受 精卵体外培养的方法和住牛胚胎分级C 本规程适用于牛毛牛体外受精胚胎生产技术推广应用的规范化操作。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 4143 牛冷冻精液 GB !T 25881 牛胚胎 NY !T 1674 牛羊胚胎质量检测技术规程 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本规程。 3. 1 卵母细胞体外成熟 In vitro maturation , IVM 指从活体或离体可毛牛卵巢的卵j包中采集未成熟的卵母细胞，在体外进行培养，使之恢复减数分裂到 MII期并具备受精能力的发育过程。 3. 2 体外受精 In vitro ferti I izat ion , IV 通过人为操作使哺乳动物的精子和卵子在体外环境中完成受精过程的技术。 3.3 体外胚胎生产技术 In vitro embryo production , IVEP 通过采集牛毛牛卵母细胞，将之经过体外成熟培养 (In vitro maturation , I VM) 后与获能的桔子进 行体外受精 (In vi tro fertilization , IVF) ，再经过受精卵的体外培养(In vitro cu l ture , IVC) 等 一系列过程，在体外生产出可用于移植胚胎的技术。 4 试剂、耗材、设备和实验室要求 4.1 试剂 DB63/T 1163--2012 所用的试剂、药品以及要求见附录A。 4. 2 耗材 所用耗材见附录A。 4. 3 设备 所用主要设备见附录Ao 4.4 实验室要求 工作区由准备室、缓冲间、无菌间、细胞保存室组成。其中，缓冲问面积不小于3平方米，并设有 更衣柜和紫外灯。紫外灯管距地面不应超过2. 5米，每平方厘米有o. 06微瓦能量的照射，每次照射时间 为20分钟~30分钟。无菌室无菌等级的最低标准应达到万级。各种器具的清洗、消毒见附录80 5 卵母细胞采集 5. 1 活体采卵 借助超声波探测仪直接从活体悟牛的卵巢中吸取卵