生化教案实验一还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法).docxVIP

实验一 还原糖和总糖的测定 (3,5- 二硝基水杨酸比色法 ) 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理 2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。 还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。单糖都是还原糖，双糖和多糖不 一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用各 种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。对非 还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别 求出样品中还原糖和总糖的含量 (常以葡萄糖含量计 )。 还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂 3,5-二硝 基水杨酸则被还原为桔红色的 3-氨基 -5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的 量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在 540nm 波长下测定 吸光度，参照标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多 糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时 lim  162n 18 应乘以系数 0.9 （ n 180n ） （ DNS） （ 3—氨基— 5—硝基水杨酸） 黄色 桔红色 三、实验材料和仪器 1、实验材料 面粉； 1mg/mL 葡萄糖标准液； 3,5-二硝基水杨酸 (DNS)试剂；碘 -碘化钾溶液；酚酞指示