基因工程与蛋白质工程知识归纳及试题例析.pdfVIP

1 逆转录酶 以 RNA为模板合成 DNA 逆转录及基因工程 特别注意： （1 ）限制性核酸内切酶的来源：多数来自原核生物；作用特点：主要切割外源DNA, 对自身的 DNA不起作用从而达到保护自身的目的；作用结果：形成 DNA片断末端。 （2 ）各种酶都具有专一性,特别是限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列,并在特定 的碱基之间切开。 2 ．基因工程的基本操作程序 （1 ）获取目的基因 ①基因文库：是将含有某种生物不同基因的许多 DNA片段,导入受体菌的群体中通过 克隆而储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 ②基因组文库：基因文库中含有一种生物所有的基因就叫做基因组文库。 ③部分基因文库：含有一种生物的部分基因,就叫做部分基因文库,如 cDNA文库。 PCR 技术与 DNA 复制的比较 比较项目 PCR 技术 DNA 复制 相 原理 DNA双链复制（（碱基互补配对） 同 原料 四种游离的脱氧核苷 点 条件 模板、ATP、酶等 解旋方式 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 不 场所 体外复制 主要在细胞核内 同 酶 热稳定的 DNA聚合酶（Taq酶） 细胞内含有的 DNA聚合酶 点 结果 在短时间内形成大量的 DNA片段 形成整个 DNA分子 （2 ）基因表达载体的构建（基因工程的核心） ①构建目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使 目的基因能够表达和发挥作用。 ②一个基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因等。 ③构建方法 （3 ）将目的基因导入受体细胞—转化 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2+处理法 2 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 将目的基因插入 Ti质粒的 将含有目的基因的表达载体 Ca2+处理细胞→感受态细胞 TDNA 上→农杆菌→导入植 提纯→取卵（受精卵）→显 →重组表达载体与感受态细 转化过程 物细胞→整合到受体细胞的 微注射→受精卵发育→获得 胞混合→感受态细胞吸收 DNA→表达 具有新性状的动物 DNA分子 特别注意：受体细胞中常用植物受精卵或体细胞（经组织培养）、动物受精卵（一般 不用体细胞）、微生物——大肠杆菌、酵母菌等,但要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素 则必需用真核生物酵母菌——需内质网、高尔基体的加工、分泌。一般不用支原体,原因 是它营寄生生活；一定不能用哺乳动物成熟红细胞,原因是它无细胞核和众多的细胞器, 不能合成蛋白质。 （4 ）目的基因的检测与鉴定 3 ．基因工程和蛋白质工程比较 比较项目 基因工程 蛋白质工程 原理 基因重组 中心法则的逆转 获取目的基因→构建表达载体→导入受体 预期蛋白质效用→设计蛋白质结构→推测 过程 细胞→目的基因的检测与鉴定 氨基酸序列→合成 DNA→表达出蛋白质 区 定向改造生物的遗传特性,以获得人类所 别 实质 需要的生物类型或生物产品（基因的异体 定向改造或生产人类所需要的蛋白质 表达）