2020茚三酮显色法测定氨基酸含量.pptVIP

实验三 茚三酮显色法测定氨基酸含量 一、实验原理 ? 茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与 茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化 合物。颜色的深浅与氨基酸的含量成正比， 可通过测定 570nm 处的光密度，测定氨基 酸的含量 二、试剂与材料 ? （ 1 ） 标准氨基酸溶液： 配制成 0.3mM 溶液 （本实验用赖氨酸） ( 已配 ) ? （ 2 ） pH5.4, 2M 醋酸缓冲液： 量取 2M 86ml 醋酸钠溶液，加入 14ml 2M 乙酸混合而成。 用 pH 计较正（ 250ml/ 班） ? （ 3 ） 茚三酮显色液： 称取 85mg 茚三酮和 15mg 还原茚三酮，用 10ml 乙二醇甲醚溶解 （ 15ml/ 组） ? 还原型茚三酮按下法制备：称取 0.5g 茚三酮 ， 用 12.5ml 沸蒸馏水 溶解，得黄色溶液。将 0.5g 维生素 C 用 25ml 温蒸馏水 溶解，一边搅 拌一边将维生素 C 溶液滴加到茚三酮溶液中， 不断出现沉淀滴定后继续 搅拌 15min ，然后 在冰箱内冷却到 4℃ ，过滤、沉淀用冷水洗 涤 3 次， 真空干燥， 置五氧化二磷真空干燥 器中保存备用 ? （ 4 ） 60% 乙醇（ 50ml/ 组 ） ? （ 5 ）样品液：每 ml 含 0.5-50ug 氨基酸（已配） ? （ 6 ）分光