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植物组织培养 风景园林系 宗树斌 Tel项目九 蝴蝶兰的组织培养与快繁技术 学习目标 了解蝴蝶兰、蝴蝶兰产业及蝴蝶兰组培快繁情况； 掌握蝴蝶兰组培快繁主要途径——无菌播种和花梗腋芽快繁的步骤、方法； 熟悉蝴蝶兰的其他快繁途径及其他兰花的组培快繁情况。 主要内容 相关阅读 认识蝴蝶兰 1、种子无菌播种 2、花梗腋芽诱导培养 3、其它外植体诱导培养 讨论：蝴蝶兰组培外植体的选择 知识拓展：其它兰花的组培技术 相关阅读 认识蝴蝶兰 蝴蝶兰( Phalaenopsis hybrid) 属兰科(Orchidaceae) 蝴蝶兰属( Phalaenopsis) 植物。其花形奇特，姿态优雅，色彩鲜艳，花期长久，素有“兰花皇后”之美誉，观赏价值极高。 蝴蝶兰为典型的单茎性热带附生兰, 植株很少发生侧枝, 分株繁殖系数极低; 其种子内不含胚乳, 自然条件下很难萌发, 发芽率极低, 故自身的营养繁殖和种子繁殖均难以满足大量繁殖的需要。组织培养和无菌播种是其大量繁殖的重要手段。应用植物组织培养技术进行蝴蝶兰快速繁殖可以缩短繁育周期, 获得大量成株, 并且可以保持优良性状, 维护种质资源。 蝴蝶兰组织培养快速繁殖主要通过两条途径：一是利用种子无菌发芽，二是从离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎的增殖培养，得到大量幼苗。 蝴蝶兰的工业化生产十分成功，通过组织培养技术和无菌播种技术大规模繁殖种苗，最后作为盆花和切花销售，在兰花市场上占有相当大的比例。 近几年来，随着我国经济的迅速发展，兰花业非常火热，国内建立了许多大型兰花生产和经营公司，均以生产蝴蝶兰为主。 1、种子无菌播种 讨论：种子无菌播种组培的优缺点 1.1授粉 1.2果实采收与接种 1.3种子苗的培养 1.1授粉 蝴蝶兰在开花后4~6天进行授粉的成功率最高。授粉时的温度、光照对授粉成功与否有较大的影响。用于授粉的花粉必须为鲜黄色，粘性好，松散而不板结，最好用刚开花的花粉。若花粉变成深黄色至黄褐色，压之不会散开，这样的花粉进行授粉通常不能成功。 1.2果实采收和播种 授粉成功的花朵3~4个月后果荚便可进行试管无菌播种。 将采收的蝴蝶兰果荚用75﹪酒精擦洗干净，用0.1﹪的HgCl2消毒8~10分钟，用无菌水冲洗5次，吸干。用刀片将果荚内细如粉尘的种子取出，置于花宝1号+香蕉50克∕升+乳蛋白2克∕升+蔗糖20克∕升+琼脂8克∕升的培养基中。 1.3种子苗的转接培养 播种15天可见淡绿色的已膨大了的胚，50~60天行成1.5~2毫米的原球茎。然后，转至花宝1号或MS+BA1毫克∕升的培养基中，50~60天后长成2~3片叶的小苗。再转至花宝1号生根培养基中，约60天后长成叶片间距6~8厘米的完整小苗。因此，蝴蝶兰播种至出瓶约需5~6个月。 2 花梗腋芽诱导培养 2.1取外植体 2.2初代培养 2.3继代培养 2.4生根培养 2.5驯化移栽 2.1取外植体 取材部位：在将开花的植株上，当花梗抽出15cm左右时，取材较为适宜。 消毒与接种 在温室中，剪取整枝花梗，经流水冲洗后，首先用10％次氯酸钠溶液表面消毒5min，无菌水冲洗干净，然后剥去最外一层苞叶，再用5％次氯酸钠溶液消毒15min，无菌水冲洗干净后，将花梗剪成长约2cm带腋芽的切段，基部向下插入MS十BA3.0-5.0mg/L的培养基上。 2.2初代培养 花梗腋芽的培养，要求温度25-28℃，光照度1000-20001x，光照10h／d，培养基中蔗糖30g/L、琼脂6g/L。 3-4周后腋芽明显膨大变绿，6-8周后腋芽生长成为小植株，并在基部开始生有丛生芽。 花梗腋芽培养技术流程 2.3继代培养 花梗腋芽培养生成的丛生芽，经55—60d的培养，花梗基部和培养基逐渐变黑，这时将丛生芽切下转接到MS十BA 3.0-5.0mg/L的培养基继代培养，约50d后可生成新的丛生芽，增殖倍数为3—4。 2.4 生根培养 当原球茎继代增殖到一定数量