Qiagen全血基因组DNA提取标准步骤(51185).docVIP

全血基因组DNA提取 试剂盒名称： QIAamp DNA Blood Midi Kit（100） Qiagen全血基因组DNA提取试剂盒 试剂盒货号： 51185 前期准备： 1.5mL EP管、水浴锅、水平转子离心机、震荡器等设备耗材准备，试剂盒提供的蛋白酶溶解、AW1和AW2使用前加入相应体积的无水乙醇。 注：所需设备耗材由新华医院分子诊断实验室提供。 实验步骤： 1、往15mL离心管管底加入100微升Qiagen蛋白酶。 2、加入1mL全血。 注：全血体积不足1mL时，PBS补齐1mL。 加入1.2mL AL缓冲液，充分混匀，震荡器上斡旋震荡至少一分钟，使溶液成为均相溶液。 70℃水浴锅温育10分钟。 加入1mL无水乙醇，充分震荡。 转移液体至吸附柱中，3000rpm离心3分钟，拿出吸附柱，倾倒滤液，将吸附柱重新放回15mL离心管中。 小心加入AW1缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心1分钟。 加入2mL AW2缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心15分钟。 将吸附柱转移至一新的15mL离心管中，弃去装有滤液的收集管。 加入200微升AE洗脱液，室温静置5分钟，5000rpm离心2分钟。 将获得的基因组DNA进行浓度及质量测定。