变性梯度凝胶电泳.docxVIP

变性梯度凝胶电泳 (DGGE 是一种根据 DNA 片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链 ,称之为变性。 核酸 50%发生变性时的温度称为熔解温度 (Tm。Tm 值主要取决于 DNA 分子中 GC 含量的多少。 DGGE 将凝胶设置在双重变性条件下 :温度 50~60 ℃,变性剂 0~100%。当一双链 DNA 片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时 ,此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段 DNA 的低熔点区的 Tm 值 ,此区便开始熔解 ,而高熔点区仍为双链。这种局 部解链的 DNA 分子迁移率发生改变 ,达到分离的效果。 Tm 的改变依赖 于 DNA 序列 ,即使一个碱基的替代就可引起 Tm 值的升高和降低。因此 , DGGE 可以检测 DNA 分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于 10 个碱基的缺失突变。 详细 实验方法 ?变性梯度凝胶电泳 (DGGE 实验材料 ?DNA 样品 试剂、试剂盒 ?尿素 ?去离子甲酰胺 ?丙烯酰胺 ?甲叉双丙烯酰胺 ?琼脂糖 仪器、耗材 ?PCR 扩增仪 ?变性梯度凝胶电泳仪 ?凝胶成像及分析系统 ?紫外透射仪 ?高速离心机 ?电泳仪 ?电泳槽 ?微量加样器 ?Tip 头 ?Tip 头盒 ?Eppendorf 管 ?Eppendorf 管架 一、实验原理 变性梯度凝胶电泳 (DGGE 是一种