杭州市副溶血弧菌血清型、毒力基因、耐药性及分子分型调查.docxVIP

杭州市副溶血弧菌血清型、毒力基因、耐药性及分子分型调查 目的:副溶血弧菌 （Vibrio parahaemolyticus,VP） 是一种革兰阴性细菌 ,广 泛分布于海洋、河口和海产品中。 人类食用了被副溶血弧菌污染的海产品如花蛤 等贝类食品 , 可能会引起腹泻或食物中毒。 据报道副溶血弧菌已经在多个国家和地区暴发流行 , 成为世界范围内引起旅 行者腹泻的主因之一。 我国食源性疾病监测网站的统计数据显示副溶血弧菌已经 成为导致我国食源性疾病的主要病原菌。 杭州地处我国东南沿海 , 气候湿热多雨 ,居民喜欢食用花蛤等各类海产品 , 是 副溶血弧菌导致腹泻的高发地区。 本研究对杭州地区急性腹泻患者的粪便标本进 行收集采样并开展对副溶血弧菌的调查 , 了解副溶血弧菌在杭州地区的流行现状 通过对血清型和药敏的检测 , 明确杭州地区副溶血弧菌血清型构成谱和耐药谱 ; 通过毒力基因检测和分子分型研究 , 从分子水平来研究探讨杭州地区副溶血弧菌 的毒力特征以及各菌株间的同源性和遗传关系 , 为副溶血弧菌防控、治疗提供依 据 , 并为进一步的研究奠定基础。 方法:收集 2013年到 2015年间浙江大学医学院附属第一医院门诊急性腹泻 患者来源的 120 株副溶血弧菌 , 用血清凝集法对其进行血清型鉴定、用 K-B 法对 其进行药敏试验、用PCR和基因测序来检测其毒力基因并进行多位点序列分析 ， 对副溶血弧菌进行流行病学分析。结果 :1、 2013年 6月至 2015年9月,共收集 到 120 株副溶血弧菌菌株 , 其中男性占 42.5%（51 株）, 女性占 57.5%（69 株 ）; 不同 年龄组的分布差异较大 , 以 18-44 岁的青壮年最高 , 为 64.2%（77 株 ）; 夏季检出的 菌株最多 , 占 78.3%（94 株） 。 2.120株副溶血弧菌中有112株（93.3%）发生0血清型凝集,分属于01、02、 03、04、05五种血清群,以03为主(71.7%,80株);110株(91.7%)发生K血清型 凝集,分属于17种K抗原血清,以K6为主(66.7%,80株),另外K8有8株 (6.7%),K60有4株(3.3%)。共有21种O K血清型组合(不包括OUT:KU■型别)， 以 03:K6(80 株,66.7%)为主,其次为 04:K8(8 株,6.7%) 。 另有8株(6.7%)未鉴定出O K型别，归类于OUT:KU■型。3、副溶血弧菌对 本实验的 13 种抗生素大都保持着较高的敏感性 , 尤其对亚胺培南和哌拉西林 / 他 唑巴坦未检测到耐药菌株 , 敏感率达到 100%;对阿米卡星的敏感率为 70.8%。 但是对头孢唑啉、头孢呋辛和氨苄西林的敏感率分别只有 45.0%、55.0%和 13.4%。本实验发现 14株菌株对两种及以上的抗生素耐药 ,其中 7株对 3种以上 的抗生素耐药 , 而且有两株分别对 7 种和 8 种抗生素耐药。 4、120株副溶血弧菌均携带tlh基因,112株(93.3%)有tdh基因,仅6株(5.0%) 有trh基因。本实验中，共检出致病性菌株114株(占95.0%),包括108株tdh+trh- 菌株,4株tdh+trh+菌株和2株tdh-trh+菌株；同时检出非致病性菌株 6株(5.0%) 大流行菌株(tdh+,trh- 和toxRS/new+)共77株,占64.1%;非大流行菌株共 43株, 占 35.6%。 64株大流行菌株携带 orf8 基因, 占所有大流行菌株的 83.1%。 77株大流行菌株共包括 9种血清型,主要为 03:K6(59 株,76.6%)。 5、 T3SS1 基因存在于所有的菌株中 ,其中 116株(96.7%)副溶血弧菌包括了其所有的 4个基 因。 4株(3.3%)tdh+trh- 菌株缺少T3SS1的4个基因中的1个或者2个基因。 T3SS2a基因大都分布在tdh+的菌株(tdh+trh-和tdh+trh+菌株)中,不存在于 tdh-trh+ 的菌株中 , 但在 tdh-trh- 菌株中也有检出。 108株tdh+trh-菌株中的107株(99.1%)包含所有T3SS2a的4个基因,只有 1株缺少VP1362[vopB2]基因。T3SS2P则全部在trh+的菌株(tdh+trh+和 tdh-trh+ 菌株)中检出,无任何一株tdh+trh-和tdh-trh-菌株携带T3SS2B基因。 6、115株副溶血弧菌共检出21种序列型别(STs),其中ST3最多为80株 (69.6%),其次 ST332 为 10 株(8.7%),ST88 为 5 株(4.3%),ST120 为 3 株 (2.6%),其他17种STs各一株。eBURsT将本研究中得到的21种STs归类为8