DB22T 3172.1-2020流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测 第 1 部分：H7N9亚型禽流感病毒.pdfVIP

ICS 11.220 B 41 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 3172.1—2020 流感病毒HA 和 NA 基因荧光 RT-PCR检测 第 1 部分：H7N9 亚型禽流感病毒 Real-time RT-PCR detection on HA and NA genes of influenza virus Part 1 H7N9 subtype avian influenza virus ： 2020 - 10 - 14 发布 2020 - 10 - 30 实施 吉林省市场监督管理厅 发 布 DB22/T 3172.1—2020 5.1 生物安全措施 所有培养物和废弃物的处置应按照GB 19489中的有关规定执行。 5.2 防污染措施 防止污染措施应符合GB/T 27401的规定。 6 试剂与材料 6.1 试剂 6.1.1 阴性对照：不含禽流感病毒的鸡胚尿囊液或组织。 6.1.2 阳性对照：体外转录 H7N9 亚型流感病毒非感染性 RNA，-20 ℃保存备用。 6.1.3 2×RT-PCR Buffer。 6.1.4 RT Enzyme Mix。 6.1.5 Taq 酶。 6.1.6 DEPC 水：0.1% DEPC 处理后的去离子水。 6.1.7 引物与探针：见表 1： 表1 H7N9亚型禽流感病毒 HA基因和 NA基因引物和探针 引物F1 5’–TGCACAGGGAGAGGGAACTG–3’ HA 基因 引物R1 5’–CAAATTGTTGGTTGGTTTTTGC–3’ 探针 P1 FAM–TGCAGATTACAAAAGCACT–TAMRA 引物F2 5’ –GTGGAAGACCCAAGGAGGATAA–3’ NA 基因 引物R2 5’ –CCCATCAGGCCAGTTCCAT–3’ 探针 P2 VIC–TTCCAGTACAGAGTTCC–MGB 6.2 材料 6.2.1 离心管（1.5 mL、0.2 mL）。 6.2.2 荧光 PCR 反应管（0.1 mL、0.2 mL）。 7 仪器设备 7.1 生物安全柜。 7.2 高速冷冻离心机（13 000 r/min）。 7.3 微量移液器 (2.5 µL、10 µL、100 µL、1 000 µL)。 7.4 超低温冰箱（-80 ℃）。