大小型层的析柱装填实践介绍.pptVIP

TOYOPEARL树脂填料 大小型工业制备色谱柱的装填实践 Pall A. Sprauer-5/06  TOYOPEARL树脂填料的装填 内容提要 装填前的准备工作 小颗粒的去除 缓冲液平衡 匀浆准备 装填步骤/层析柱类型 层析柱的操作 柱子的平衡与柱效评价 保存 Peak Biotech  TOYOPEARL树脂填料的装填 装填的一般原则 ☆ TOYOPEARL的装填压力最好在05-5bar的范围内 ☆装填流速至少比实际操作流速高50% 不要使用会产生剪切力的装置(如:磁力搅拌器、齿轮泵) 这些装置会磨碎树脂填料并产生小颗粒 ☆ TOYOPEARL是种刚性强的树脂填料,装填时务必三 区别于一般的软式琼脂糖凝胶 erformance/ Gotec  TOYOPEARL树脂填料的装填 基本步骤 TOYOPEARL出货时为悬去除小颗粒装填缓冲液平衡 浮液状态(含20%乙醇) 匀浆准备 装柱  小颗粒的去除 装柱前务必进行小颗粒去除的操作! 小颗粒的存在会阻塞筛板或烧结板,并最终会导致整个柱子的压降增大 小颗粒的去除采取悬浮静置移注法 重复这一步骤不少于3次 借助显微镜可检 查小颗粒的存在 destroyed particles due to manifold packing in a steel column  TOYOPEARL的静置时间 TOYOPEARL粒径 水中静置时间 Coarse C级规格:100m1530Min Medium M级规格:65μm 30-45Min Fine F级规格:45m 45-60Min Superfine S级规格:35μm 60-90Min 显微镜微观显示- Toyopearl650M A Amicon Moduline-120cm ID  装填缓冲液的平衡 在去除小颗粒时的最后一次步骤中可加入装填缓冲液进行填料的 平衡 最好根据实际生产中所使用的缓冲液选取合适的装填缓冲溶液 般来讲,分离纯化工艺中将使用到的最高离子强度的流动相是 装填缓冲液的首选 这一操作可以将填料装得最为紧密,并且可以防止死体积的发生或胶体内沟槽 的出现  TOYOPEARL-典型的装填缓冲溶液 SEC HW-40. HW-50 H-55 H-65 and Hw-75 0. 1M Na2SO4, NaNO3, or NaCL in 50mM I hate or Tris adsorption chromatography like Sephadex LH-20 DEAE-650, QAE-550C, Super-Q-650, CM-650 SP-550C, Megacap ll SP-550EC and SP-650 1 M Nacl in 50 mM phosphate, Tris, or acetate buffer er-650, Phenyl-650, PPG-600m, Butyl-650, Super Butyl- 550C and Hexyl-650c 2M Na2SO4 or(NH4)2SO, in 50mM phosphate bufter 0. 5M Nacl in 0. 1 M NaHCO] or phosphate buffer myl-650M, AF-Amino-650M and 1M Nacl in 100mM phosphate or NaHCOa buffer AF-Carboxy-650M AF-Heparin HC-560M 2M Nacl in 20 nM phosphate buffer 0. 5M NaCl or 0. 2M glycine in 20mM phosphate or Tris buffer AF-Blue HC-650M. AF-Red-650M 2M KCI or Nacl in 20mM phosphate  匀浆准备 令利用量筒测量静置胶体体积或使用水泵抽滤浆液至湿滤饼后 计算装填所需要的填料体积 令通过添加装填缓冲液调节浆液浓度: 流动式装填柱~40-70%(v) 自动装填柱20-60%v) 令最终装填好的柱床体积是要小于装填前胶体静置体积或抽干 的湿滤饼的体积 Slurry preparation in the column Settling resi rry preparation in a separate tank Amicon No  对于给定的柱子,装柱所需的静置胶体积 Toyopearl HW-40.HW50.HW-55 使用约11倍柱体积的静置胶