ATP含量测定方法.pdfVIP

ATP 含量测定 一、仪器与试剂 (1) FQ-300 发光光度计，100ml 烧杯，比色杯 (2) 5×10-8mmol/L 的ATP 标准液： 一支ATP 加入1ml 萤光素酶缓冲液 (3) 萤光素酶缓冲液：一支萤光素酶缓冲液粉剂用蒸馏水定容到50ml (4) 荧光素酶溶液：每毫升缓冲液中加入荧光素酶3mg 二、测定步骤 （1）标准曲线 将ATP 标准液配成5×10-8 、5×10-9 、5×10-10 、5×10- 11 、5×10-12 、5×10-13 µmol/ml 等浓度梯度，于发光光度计比色测定，测定峰高值，以ATP 浓度的对数为横坐标， 以峰高值的对数为纵坐标，绘制标准曲线。 （2 ）测定 准确称取1g 左右块根，剪碎→放入刻度试管中，加入4-5ml 蒸馏水→沸水浴提 取15min→冷却后定容至10ml （即为ATP 提取液）。 取0.2mlATP 提取液于比色杯，放入反应暗室，注射0.8ml 萤光素酶溶液后，记 录发光峰值。 三、计算 -1 ATP （μmol.g FW ）=查得ATP 量 （µmol/ml ）×提取液总体积 （ml ）/样品重 （g ）