实验一载体类型与质粒DNA提提取分离和纯化.pptVIP

实验一、质粒DNA的提取、分离和纯化 质粒与载体的基本知识 载体( vecto.):把一个有用的目的DNA片段通过重组 DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具。 载体的基本类型: 质粒( plasmid):重组DNA技术中最常见的载体。 入噬菌体( phage C BAC(bacterial artificial chromosome YAC(east artificial chromosome)  质粒的基本性质: 质粒是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等, 为双链、共价闭合环状DNA分子ccDNΔ,并以超螺旋状态存 在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞 中,它具有自主的复制和转录系统,但质粒的复制和转录需 要宿主细胞编码的某些酶和蛋白质。此外,质粒还具有编码 某些酶的基因,如对抗生素的抗性等 质粒在细胞内的复制一般有二种:紧密控制型( stringent control)和松弛控制型( relaxed control)。前者只在细胞周 期的一定阶段进行复制,通常每个细胞内只含有一个或几个 质粒分子;后者在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细 胞中有许多拷贝,一般在20个以上。在细胞培养过程中,加 适当氯霉素可使松弛型质粒的拷贝数由原来的20多个扩增至 1000-3000个。  质粒的不