分子生物学：第一章_基因的结构与功能.pptVIP

常用的标记物： （一）放射性标记物： 32P、3H、35S、14C、125I、131I 特性： ①检测特异性强，灵敏度高 ②不影响碱基配对的特异性和稳定性 ③易造成放射性污染 ④半衰期短，不能长时间存放 检测：放射自显影检测杂交信号 ————放射线可以在X射线片上成影 （二）非放射性标记物 常用的标记物：生物素（biotin） 地高辛（digoxigenin） 光生物素（photobiotin） 标记方法： 先将标记物预先连接到dNTP上，再用切口平移、随机引物等方法参进探针。 优点：无环境污染，可较长时间贮存 缺点：灵敏度较放射性探针差 非放射性探针检测方法： 不能直接检测，分两步：偶联反应和显色反应 偶联反应： 利用抗原抗体反应 核酸分子杂交技术 一、类型：根据反应环境分为 1.固相杂交：将需要杂交的一条核酸链先 固定在固体支持物上，另一条核酸链游离在液体中。 固体支持物种类：硝酸纤维素膜、尼龙膜、乳胶颗粒、 磁珠、微孔板等 2.液相杂交：参与反应的两条核酸链都游离在液体中 Southern印迹法：将电泳分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上,再进行杂交.