鼻胃蝇转录组分析及嗅觉感受基因的鉴定.pdfVIP

摘要 摘要 鼻胃蝇（Gasterophilus nasalis），专性寄生于马科动物消化道内，又因其在 各地分布区系和寄生部位的特殊性，具有流行病学和系统发育研究价值。鼻胃 蝇作为全球马胃蝇区系的次优势种，幼虫寄生于十二指肠上部和幽门，成虫通 过嗅觉系统寻找配偶和定位宿主并产卵。嗅觉感受蛋白在鼻胃蝇成虫生命过程 中至关重要，是开展胃蝇属物种产卵场所发生分化研究的关键因子。本论文通 过对鼻胃蝇成虫进行了转录组测序以及序列从头拼接和生信分析，结果如下： 1.基于高通量测序技术，共获得了 27.47GB 的clean data ，经 de novo 组装 后得到 37289 条 unigenes 。通过比对综合数据库 NCBI Nr 、Swiss-Prot、KEGG、 COG、GO 、Pfam，共有13896 条unigenes （37.27% ）被成功注释。在Nr 数据 库中，鼻胃蝇 unigenes 注释到铜绿蝇 （Lucilia cuprina ）的序列信息最多，达到 40.85% 。 2. 在鼻胃蝇转录组All-Unigenes 中经MISA 筛选得到SSR 总数为28250 个， 位于16538 条Unigenes 当中，出现频率为44.35% 。其中三碱基(36.02%) 和单碱 基(27.25%) 为主要重复类型。研究共发现 276 种重复基元，出现最多的为 A/T 类型(26.35%) ，继而是AC/GT 类型的基元 ( 13.74%) 。由三碱基构成的鼻胃蝇 SSR 基元占最多，分别为15 bp (12.10%) ，18 bp ( 10.18%)和12 bp (8.12%) 。 3. 本研究从鼻胃蝇转录组数据库中共鉴定出85 个嗅觉相关感受基因，其中 有21 个OBPs （气味结合蛋白），4 个CSPs （化学感受蛋白）、20 个ORs （气味 受体）、21 个 IRs （离子型受体）、17 个 GRs （味觉受体）、2 个 SNMPs （感觉 神经元膜蛋白）基因，通过系统发育分析鉴定出胃蝇属特有的 ORs ，而其他种 类的嗅觉基因均可与双翅目其他昆虫的嗅觉基因聚为一枝，其中仅有 17 条嗅觉 基因与黑腹胃蝇的嗅觉基因蛋白序列相似度在 90% 以上，表明二者在嗅觉感受 上差异较大。 综上所述，基于 RNA-seq 技术，可实现鼻胃蝇 SSR 分子标记的高效率开发 以及嗅觉基因的挖掘，可为后续研究胃蝇属物种产卵场所发生分化提供基因数 据。 II 目录 目录 1. 引言1 1.1. 马胃蝇概况1 1.1.1. 马胃蝇研究背景1 1.1.2. 马胃蝇种类及分布2 1.1.3. 马胃蝇生活史2 1.1.4. 马胃蝇分子生物学研究进展3 1.2. 昆虫嗅觉基因研究进展4 1.2.1. 昆虫嗅觉识别机制4 1.2.2. 气味结合蛋白5 1.2.3. 化学感受蛋白6 1.2.4. 感觉神经元膜蛋白7 1.2.5. 气味受体7 1.2.6. 离子型受体8 1.2.7. 味觉受体8 1.3. 研究目的9 1.4. 技术路线 10 2. 鼻胃蝇成虫转录组测序分析 11 2.1. 材料与方法 11 2.1.1. 样品采集 11 2.1.2. 实验方法 11 . 样本RNA 提取及质检 11 . cDNA 文库构建和Illumina 测序 11