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第 1 页微生物学实验指导书（ ） 微生物学实验指导书 目 录 实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙2 实验二 普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙5 实验三 细菌的革兰氏染色和芽孢染色∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙12 实验四 放线菌和真菌的制片、染色和形态观察∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙16 实验五 酵母菌形态观察与死活细胞鉴别及显微镜直接计数法∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙16 生命科学学院微生物学教研室编写 第 2 页微生物学实验指导书（ ） 实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查 微生物以其微小的形体广泛地分布在自然环境的各个角落，包括空气、土壤、水、动植物、 人体的体表和某些脏器。在有人群活动的场所，特别是人口密度相对大的一些地方，如：商场、 影剧院、会议室、教室、实验室等都会散落着细菌的营养体、芽孢和霉菌的孢子。只不过因为 它们体积太微小（细菌的大小在1~10μm之间），远远低于人肉眼的分辨极限（人眼的正常分辨 能力一般为0.25mm，即250μm ），而看不见它们，但它们确实真实存在。由于空气、器具、器 皿、人体体表等处缺乏微生物进行繁衍所需要的足够水分和营养物，它们只是“暂居”于此。一 旦满足它们的营养要求，在适宜的温度条件下，它们将迅速地生长、繁殖，其“子孙后代”将会 聚集在一起，形成一个人眼可见的群体——菌落。不同微生物形成的菌落差异很大，人们可根 据菌落的形状、大小、质地、颜色对它们进行表观的判断和认识。不同环境条件中栖息的微生 物有所不同，有些是对人无害的腐生菌，有些是致病菌，有些则是改变条件才可致病的条件致 病菌。 本实验是对初学者的入门实验，通过从实验室内空气、实验者的头发、皮肤、手指、钱币 等处取样，接种于营养琼脂培养基，37°C培养1~2天，可验证微生物的存在，并观察微生物菌落 的形态和数量。 一、实验器材 1.培养基 肉膏蛋白胨琼脂平板。 2.溶液和试剂 无菌水。 3.仪器和其他用品 灭菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。 二、目的要求 1.通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物。 2. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特征。 3.体会无菌操作的重要性。 三、基本原理 进入空气中的微生物菌体和霉菌的孢子，或“漂浮”在空气中，或附在空气中细小的尘埃上， 或沉落在桌面、地面、人体体表的皮肤、手指上；实验室的门把手、钱币经多人的触摸也会沾 染微生物，有时甚至会污染病原微生物。如何知道我们周围存在看不见的微生物呢?也就是说如 何使“看不见”变得“看得见”呢?显微镜技术是其中一种方法，这是通过放大微生物个体，使我们 能够看到它们；另一种方法是通过“放大”成子细胞群体(菌落) ，使我们看到它们的存在，即通过 培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一 起的肉眼可见的菌落(colony) 。本实验将采取后一种方法检查实验室环境和人体表面的微生物， 从而使学生牢固树立“无菌概念” 。 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在 37°C温度下培养，1~2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞 群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面 干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜 色以及质地疏松或紧密等。霉菌和放线菌在培养基上形成紧密或疏松的菌丝，菌丝体上生成不 同颜色和不同形状的孢子，其菌落也有絮状、蛛网状、绒状和放射状等明显的特征。因此， 过营养琼脂平板上生长出的微生物菌落，可