光激化学发光分析技术.pptx

光激化学发光分析技术─ Light Initiated Chemiluminescent Assay李会强天津医科大学 医学检验学院简介 AlphaScreen? Technology（1993） AlphaLISA?（Perkin Elmer） Luminescence Oxygen Channel Immunoassay；LOCI Light Initiated Chemiluminescent Assay；LICA新型化学发光免疫分析 光激化学发光分析 均相免疫分析 全程“无洗涤”程序 新颖标记方式 以“纳米微球”为载体，含有“发光剂和感光剂”且 化学偶联“生物分子”问题一：化学发光免疫分析现状标记免疫分析的创立放射免疫分析（1959） radio-immuno-assay ，RIA Yalow and Berson Nobel prize （1977）Rosalyn Sussman Yalow罗莎琳·萨斯曼·耶洛1921-2011放射免疫分析（RIA）临床：复杂分离过程（沉淀和离心） 非均相免疫分析（沉淀分离） 液相条件结合固相吸附分离方法临床：洗涤分离 方便和快速 非均相免疫分析 免疫放射分析 immuno-radiometric-assay，RIMA 1968 ；Miles and Hales 非均相免疫分析 固相载体-纳米磁性微球 包被面积 悬浮模式 单管操作 洗涤方式纳米颗粒（球面）微孔板（平面）酶促化学发光（1） 标记物：辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酯酶（ALP） 优点：酶免疫分析，采用发光底物 缺点： 酶稳定性、温度、酸碱度影响酶活性 采用顺磁性颗粒为固相载体，磁场吸附反复洗涤酶促化学发光（2）优点：光信号稳定持续时间长 碱性磷酸酶（ALP）发光系统 发光底物 AMPPD（金刚烷）直接化学发光免疫分析（吖啶酯）（1） 标记物：吖啶酯 优点：标记物稳定，发光反应简单 缺点： 瞬间发光，持续时间短 分离洗涤过程复杂、耗时间直接化学发光免疫分析（吖啶酯）（2）洗涤误差 分离洗涤过程 磁吸附-弃液体-加液体-悬浮电化学发光免疫分析（1） 标记物：三联吡啶钌 优点： 标记物性质稳定抗干扰能力强 循环发光反应提高分析敏感度 电场启动发光可控性好效率高阳电极表面电化学发光免疫分析（2） 优点： 独特动态分离洗涤方式、分离效果好电化学发光免疫分析（4） 优点： 引入“生物素-亲和素系统”CLIAECLIA电化学发光免疫分析（4） 缺点： 洗涤耗时影响检测速度 共用测量池引起交叉污染 定期更换测量池增加成本非均相免疫分析 固有缺陷 固相洗涤分离 复杂耗时 洗涤误差 分析精密度 分析准确度定量分析和定量方式 （1） 校准品 数学函数已知浓度-信号强度 标准曲线 血清标本 信号值-数学函数-结果图：双抗体夹心（正比例函数）定量分析和定量方式 （2） 内置数学函数定量模式 数学函数 校准过程 标本测定图：内置函数定标方式定量分析和定量方式（3） 内置“函数”方式 要求高精密度问题二：光激化学发光分析的原理光激化学发光分析 基本原理（1） 化学发光反应（感光剂-发光剂） 基于能量转移（活性氧传递） 只有激发才能诱导发光 抗原-抗体结合（感光球-发光球） 提供能量转移条件（微球靠近）光信号强度决定抗原抗体结合强度光激化学发光分析 基本原理（2） 物质条件 感光剂和发光剂 空间条件 抗原抗体结合 诱导发光（控制） 激光诱导发光不发光发光微球发光感光微球基于能量转移的化学发光过程 发光体系 发光微球（FG） 接受能量 受体微球（A） 感光微球（GG） 提供能量 供体微球（D）感光微球与发光微球 发光微球（FG） 二甲基噻吩衍生物接受活性氧能量发生氧化反应释放紫外光 涂布发光物质（铕） 铕接受紫外光诱导荧光信号（615 nm） 包被抗原或抗体分子感光微球与发光微球 感光微球（GG） 涂布感光物质（酞氰） 包被链霉亲合素（SA） 接受激光照射（680 nm）致使周围氧活化成为“活性氧”分子感光微球与发光微球 感光微球（GG） 通用试剂 捕获免疫复合物（Bio-AgAb）图：光激化学发光图：电化学发光NNNNNNNNOSiOONOOSSSSSS1D1DOO22ggOOSiNNOOOOOOOONSiONN680 nm1DOOg22光激化学发光过程1O2NNNNNNOOOOSSSSSS1D1DOO22ggOOOOOOOOOOEnergytransfer340-350 nm信号放大energy450-500 nm光信号（615 nm）图：级联光化学反应过程双抗体夹心分析模式图：抗原-抗体结合满足能量转移条件诱导发光反应实例：乙型肝炎表面抗原定量分析检测试剂Ab-FG（I）Bio-Ab（II）感光微球溶液GG-SA实例：乙型肝炎核心