生物选修三课件.ppt

1970年，特明和巴尔的摩证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解回答下列问题： 例1 (1)催化①过程的酶是________；核酸酶H的作用是________。 (2)③过程也称为DNA的变性，此过程在温度高达90～95 ℃时才能完成，说明DNA分子具有________性。 (3)由图中信息分析可知，催化②⑤过程的酶都是________，两者在作用特性上的区别是_____________________________。 (4)如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶________个。 【尝试解答】　(1)反转录酶(或逆转录酶)　分解RNA (2)稳定 (3)DNA聚合酶　催化⑤过程的酶耐高温 (4)60 【解析】　根据图示可以看出，该过程是RNA在逆转录酶的催化作用下形成cDNA(负链DNA)，构成RNA—DNA中间体。中间体中的RNA再经过RNA酶H水解，而以剩下的负链DNA复制成双链DNA的过程。①过程是由RNA合成DNA的过程，需要逆转录酶进行催化。②过程是以单链DNA复制获得双链DNA的过程需要DNA聚合酶催化。⑤属于双链DNA复制的过程，需要DNA聚合酶催化。⑤过程在70～75 ℃环境下进行，所需要的酶应该能够耐高温。 【互动探究】　(1)上述过程中需要限制酶和DNA连接酶吗？ (2)由mRNA逆转录形成的DNA具有启动子吗？ 【提示】　(1)不需要。　(2)无。 【探规寻律】　(1)PCR技术不需要解旋酶，但需利用90～95 ℃高温使DNA分子解旋。 (2)PCR技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。 (3)PCR技术是对已知目的基因的扩增；从基因库中获取目的基因，是先找出含有目的基因的细胞，再通过一定的技术手段获取目的基因。 基因表达载体的构建和导入受体细胞 1．基因表达载体的构建 特别提醒 ①用限制酶切割载体和含目的基因的DNA分子时，可以使用不同的限制性核酸内切酶,但是必须切出相同黏性末端。 ②不同基因可以拼接的原因：不同生物的基因具有相同的结构和化学组成，都是双螺旋结构，都由四种脱氧核糖核苷酸组成，都遵循相同的碱基互补配对原则：A—T，G—C。 2．目的基因的导入 (1)不同受体细胞的常用导入方法 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射法 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化过程 目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 (2)目的基因导入受体细胞 ①不同生物的受体细胞不同：植物一般为体细胞，动物一般为受精卵，微生物一般为大肠杆菌。 ②上图中发生②与发生①相比，②会使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达，原因是在进行细胞分裂时，细胞核上的DNA经复制后平均分配到两个子细胞中，保证了亲子代遗传性状的稳定性，而①细胞分裂时，细胞质是不均分的，子细胞不一定含有目的基因。 (2011年高考海南卷)回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。 例2 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是____________________________。 在表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成________，常用抗原—抗体杂交技术。 (3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。 【尝试解答】(1)平　相同　(2)RNA聚合酶识别和结合的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质　Ca2＋　DNA分子杂交技术　人胰岛素 (3)T－DNA　染色体的DNA 【解析】(1)限制