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核酸结构与功能;核酸的理化性质; 核酸是含磷酸和碱基的两性电解质,通常表现为较强的酸性。可用电泳和离子交换分离纯化核酸。
在碱性条件下,RNA不稳定,可在室温下水解。利用这个性质可以测定RNA的碱基组成,也可清除DNA溶液中混杂的RNA。
核酸是线性的大分子,其在溶液中的粘度很高。RNA分子比DNA短,在溶液中的粘度低于DNA。;二、紫外吸收;1. DNA或RNA的定量
OD260=1.0相当于:
50μg/ml双链DNA
40μg/ml单链DNA(或RNA)
20μg/ml寡核苷酸
2.判断核酸样品的纯度
DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8
RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0;三、DNA的变性、复性与分子杂交;(2)增色效应:
DNA变性时其溶液OD260增高的现象。;(3)Tm:紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度,又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。;(二)复性
;1.在DNA复性过程中,将不同种类的DNA单链分子或RNA分子置同一溶液中,就可以形成杂化双链(heteroduplex)。
2.杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成,也可在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。;DNA-DNA
杂交双链分子
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