PCR荧光检测试剂盒生产质控作业规程.docVIP

PCR荧光检测试剂盒生产质量控制规程 一. 微量加样器使用要求 1．微量加样器校正：: 使用微量加样器吸10μl 10次是否为100μl。 2．加样前吸头润湿： 当吸头排空时，仍会有部分残留液体以薄膜形式吸附在吸头里面，所以，在加样时先吸打液体数次，充足润湿吸头管腔,以确保加样一致性。 3．加样时吸头应靠试管壁：加样时吸头液体顺着管壁流出，预防液滴形成因为其表面张力作用而阻止样本释放。 4．吸头是否和加样器上吸头套筒密封：样器上吸头和套筒密封完好。 5．加样时注意第一停点和第二停点：吸液是应注意大拇指按下按钮至第一停点，缓慢慢慢吸入液体。停留1s，然后将吸头提离液面。用吸纸抹去吸嘴外面可能黏附液滴。放液时经过第一停点，停1-2s后，继续按压到第二停点，排出残余液体。 6．PCR反应原液因为有甘油在冷状态较黏稠,易于1次吸收数人份，慢部分。 7．边加边看,直观估量,预防跳管。 8．低温冷藏批量DNA提取液、PCR反应液A和B取出时是否充足混匀后,分装使用，PCR反应液A和B是否避光低温冷藏和使用。 9．配PCR反应液应先加缓冲液再加PCR反应液充足混匀,必需时倒置混匀,再离心,或用灭菌吸头上下吸几次。 10．PCR反应液（包含样品）应充足混匀:确保PCR反应曲线呈S形，全阴性样品呈近似水平曲线。 二．PCR试验操作规程 程序 操作 检验 操作 1 混匀方法 每一次提醒注意 倒置混匀、移液器吹打、震荡，50000rpm离心1分钟。 2 取血清样本 1）因水分蒸发变浓 2）冻状、混浊 按（1）法混匀,再取25μl加水5μl混匀。 温水浴37℃溶解按（1）法混匀,或1rpm离心5 3 取质控品 冻状、混浊 温水浴37℃溶解按（1）法混匀或1rpm离心5 4 血清样本稀释 混匀血清 阴性血清40μl加阳性血清10μl，按（1）法混匀。5倍稀释 5 质控品稀释 混匀质控品 血清稀释液40μl加质控品10μl，按（1）法混匀5倍稀释。 6 血清样本DNA提取 DNA提取液完好 血清样本按（1）法混匀，取30μl加DNA提取液60μl，按（1）法混匀，98℃ 8分钟变性, 0℃冷却2-3分钟，1rpm，离心 7 质控品DNA变性 分装，有效，呈清液状态，未反复加热、冻融 质控品按（1）法混匀，取30μl5000rpm离心1分钟，98℃ 8 PCR反应液 混匀状态 取25μl反应液加5μl提取DNA，按（1）法混匀，5000rpm离心1分钟， 5000rpm，离心1分钟,吸收上清液。 9 PCR反应 室温10-30 PCR反应槽四角不放管。 10 设阴性对照 阴性混匀血清 CT〉38 11 阳性参考品 各浓度呈梯度 以PCRA反应液制作标准曲线，呈直线。 12 阴性质控品B 各浓度呈梯度 以PCRA和B反应液制作标准曲线，呈直线。 **血清稀释液：全阴性血清再加2倍HBV DNA提取液混匀, 5000rpm，离心1分钟，混匀血清98℃ 三.超净工作台使用、维护保养和清洁标准操作规程 1.目标  建立一个超净工作台使用、维护保养和清洁标准操作程序，使操作过程标准化。 2.职责  质量部QC负责本文件起草，质量部及QC检验人员负责本标准实施。  3.范围  本标准适适用于超净工作台使用、维护和保养和清洁。  4.内容  4.1超净工作台关键组成部分：高效过滤器、中效过滤器、通风机、电气控制及排气管道部分。  4.2安放点选择：  4.2.1应安放于卫生条件很好地方，便于清洁，门窗能够密封以避免外界污染空气对室内影响。  4.2.2安放位置应远离有震动及噪音大地方。  4.2.3严禁安放在产生大尘粒及气流大地方，以确保操作区空气正常流动。 4.3使用前检验：  4.3.1接通超净工作台电源。  4.3.2旋开风机开关，使风机开始正常运转，这时应检验高效过滤器出风面是否有风送出。  4.3.3检验照明及紫外设备能否正常运行，如不能正常运行则通知工程部检修。  4.3.4工作前必需对工作台周围环境及空气进行超净处理，认真进行清洁工作，并采取紫外线灭菌法进行灭菌处理。  4.3.5净化工作区内严禁存放无须要物品，以保持洁净气流流动不受干扰。  4.4使用：  4.4.1使用工作台时，先经过清洁液浸泡纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。  4.4.2接通电源，提前50分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累微生物，30分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。  4.4.3工作台面上，不要存放无须要物品，以保持工作区内洁净气流不