干细胞微生物学检测标准操作规程.docxVIP

干细胞微生物学检测标准操作规程（ SOP ） 北京赛托森生物科技发展有限公司 质量管理 干细胞微生物学检测标准操作规程 文件名：干细胞微生物学检测标准操作规程 文件编号： 制定人： 日期： 年 月 日 文件类型：工作标准 审核人： 日期： 年 月 日 版 次：第一版 批准人： 日期： 年 月 日 印 数：共 5份 生效日期： 年 月 日 颁发部门：质量管理 分发至： 质量副总经理、质量管理部、 QC检验室、综合办公室 修订号 修订人 批准日期 生效日期 原 因 及 目 的 变 更 记 载 一、总则 目的：建立针对实验室干细胞微生物学标准操作程序，用以规范员工的检测操 作。 范围：适用于公司内部生产干细胞的微生物学检测工作 责任：生产部、生产车间、质量管理部、 QC检验室主任、检验员对本规程的执行 负责。 检测依据： YY/ －1995 药品检验操作规程，第 6 部分，微生物测定法。二、细菌检测 所用检测试剂耗材及仪器 液体培养基：硫乙醇培养基、离心管、一次性巴斯德管琼脂培养基：胰酪胨大豆琼脂培养基、培养皿、接种环电热恒温恒湿培养箱（温度可调25℃-37℃）、超净工作台 2. 操作方法 检测过程全程需在超净工作台内完成，注意无菌操作。 培养基具体配制方法详见SOP/ZK/006 液体培养基： ① 取培养液待恢复室温 ② 将待检样本及培养基过火后拧开盖子 ③ 利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中1-2ml ④ 将加入待检样本的培养液过火后拧紧盖子 ⑤ 坐上标记方便记录与查看结果 ⑥ 37℃培养 5-7 天查看结果 ⑦ 结果鉴定：培养液浑浊为细菌污染，清澈则为未污染。 ⑧ 做好结果记录并填写质量报告 琼脂培养基： ① 取培养皿待恢复室温 ② 将待检样本过火后拧开盖子 ③ 利用一次接种环将样本接种于培养液皿中 ④ 坐上标记方便记录与查看结果 ⑤ 将培养皿倒扣置培养箱中 ⑥ 37℃培养 3-5 天查看结果 ⑦ 结果鉴定：培养皿上有否出现可疑菌落，如有则为细菌污染，若培养至第 5 天未见可疑菌落，则未污染 ⑧ 做好结果记录并填写质量报告 三、真菌检测 所用检测试剂耗材及仪器 液体培养基：改良马丁培养基、离心管、一次性巴斯德管琼脂培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基、培养皿、接种环电热恒温恒湿培养箱（温度可调25℃-37℃）、超净工作台 操作方法 检测过程全程需在超净工作台内完成，注意无菌操作。培养基具体配制方法详见SOP/ZK/006 液体培养基： 取培养液待恢复室温 ② 将待检样本及培养基过火后拧开盖子 ③ 利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中1-2ml ④ 将加入待检样本的培养液过火后拧紧盖子 ⑤ 坐上标记方便记录与查看结果 ⑥ 26℃培养 5-7 天查看结果 ⑦ 结果鉴定：培养液浑浊为真菌菌污染，清澈则为未污染。 ⑧ 做好结果记录并填写质量报告 琼脂培养基： ① 取培养皿待恢复室温 ② 将待检样本过火后拧开盖子 ③ 利用一次接种环将样本接种于培养液皿中 ④ 坐上标记方便记录与查看结果 ⑤ 将培养皿倒扣置培养箱中 ⑥ 26℃培养 3-5 天查看结果 ⑦ 结果鉴定：培养皿上有否出现可疑菌落，如有则为细菌污染，若培养至第 5 天未见可疑菌落，则未污染 ⑧ 做好结果记录并填写质量报告 四、支原体检测 支原体快速法： ① 所有操作均在室温（22-28℃）下进行 ② 打开检测板，在孔中加入40 μL Reaction Buffe A ③ 第一个孔加入 10 μL 阴性对照，其他孔加入10 μL 待测样品或阳性对照 ④ 轻轻混匀，室温孵育5 分钟 ⑤ 所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe B ⑥ 轻轻混匀，室温孵育4 分钟 ⑦ 每孔加入 5μL Stop Solution ，轻轻混匀 ⑧ 可在 30 分钟内观察样品颜色的变化或进行拍照保存： 结果分析 如果待测样品的颜色深于阴性对照，表明样品被支原体污染 如果待测样品的颜色与阴性对照相同，表明样品没有支原体污染 ⑨做好结果记录并填写质量报告 支原体 ELISA法： ① 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） ② 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl 。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40 μl ，然后再加待测样品 10μl 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀 ③ 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟 ④ 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 ⑤ 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干 ⑥ 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外 ⑦ 温育：操作同