单克隆抗体培训资料.pptVIP

11.8.3 单克隆抗体;;;2 抗体P238 ;多克隆抗体与单克隆抗体 ;比较项目 ; 3. 干扰素 脊椎动物受多种因素(如微生物)诱导产生的一组抗病毒蛋白质。可影响细胞的运动和免疫过程，也可干扰多种病毒的复制而得此名。 分子量数百至数千不等。 工程菌表达为主。;问题的引出 ;（一）历史发现 ;病毒诱导制备转化脾细胞;（二）杂交瘤技术 ;;;;1.免疫原的制备 ：;2.小白鼠免疫及脾脏细胞获得;;3.骨髓瘤细胞的获得;骨髓瘤细胞悬液的制备方法（一）：细胞培养法;骨髓瘤细胞悬液的制备方法（二）：饲养小鼠法;;饲养细胞;;4. 细胞融合;;5. 融合细胞的筛选;HAT培养基筛选法;筛选原理;;6.阳性孔的筛选;;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA);;预期结果;注意事项;7.克隆化培养;（1）有限稀释法a. 制备小鼠腹腔细胞。或再加脾细胞。 b. 制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞3中不同的稀释度。 c. 按每毫升加入5×104-1×105细胞的比例，在上述杂交瘤细胞悬液中分别加入腹腔巨噬细胞。 d. 每种杂交瘤细胞分装96孔板一块，每个稀释度32孔，每孔量为0.2ml，每孔的杂交瘤细胞数分别为0.5、3和10。