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紫外分光光度法测定维生素 C和维生素 E 含量 【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素 C和维生素 E 组成的混合物中各组分的浓度。 在这两种组分组成的混合物中， 彼此都不影响另一种物质的光吸收性质， 根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。 【关键词】紫外分光光度法；维生素 C；维生素 E；浓度 1、 引言 维生素 C（抗坏血酸）和维生素 E(α- 生育酚 ) 在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。 两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的” 。因此， 它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素 C 是水溶性 的，维生素 E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶 液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理， 在紫外 光区测定它们。 2、实验原理 根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定 在此光谱区内有吸收的单一成分。 由两种组分组成的混合物中， 若彼 此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程 度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重 叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组 分吸收峰大部分重叠时， 则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进 行测定。 混合组分中在λ 1 处的吸收等于组分 A 和组分 B 分别在λ 1 处的吸 光度之和 AA+Bλ1 ，即： A B AA+Bλ1 = κλ 1 bcA + κλ 1 bcB 同理，混合组分在λ 2 处吸光度之和 AA+Bλ2 应为： A B AA+Bλ2 = κλ 2 bcA + κλ 2 bcB 若先用 A、B 组分的标样，分别测的 A、B 两组分在λ 和λ 处的 1 2 A A B B 摩尔吸收系数κ λ 1 、κλ 2 、κλ 1、κλ 2 ；当测的未知试样在λ 1 和λ 1 处的吸光度 AA+Bλ1 和AA+Bλ2 后，解下列二元一次方程组： AA+B = κ A bcA + κ B bcB λ 1 λ 1 λ 1 AA+B = κ A bcA + κ B bcB λ 2 λ 2 λ 2 即可求得 A、B 两组分各自的浓度 cA 和cB 。 B AA+Bλ2 B AB AB cA = （AA+Bλ1 ·κλ 2 - ·κλ 1 ）/ （κ λ 1 ·κλ 2 - κλ 2 ·κλ 1 ） c B = （ A+B κ A ·A ）/ κ B λ 1 λ 1 Aλ 1 - c 一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ 1 和λ 2 宜分别选择在 A、 B两组分最大吸收峰处或其附近。 3、紫外分光光度法测定维生素 C 和维生素 E 含量 3.1 、仪器试剂 仪器：紫外 - 可见分光光度计（天津港东 UV-4501S），石英吸收 池一对 试剂：维生素 C（抗坏血酸），维生素 E(α- 生育酚 ) ，无水乙醇 3.2 、实验步骤 3.2.1 、 检查仪器 开机预热 20min，并调试至正常工作状态。 3.2.2 、 配制系列标准溶液 1）配制维生素 C 系列标准溶液：称取 0.0132g 维生素 C，溶于无水乙醇中，定量转移入 1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为 7.50 ×10-5 mol/L 。分别吸取上述溶液 4.00 mL，6.00 mL ，8.00 mL ，10.00 mL 于 4 只洁净干燥的 50 mL 容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。 2）配制维生素 E系列标准溶液：称取维生素 E0.0488g，溶于无水乙醇中，定量转移入 1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为 1.13 ×10-4 mol/L. 分别吸取上述溶液 4.00 mL， 6.00 mL ，8.00 mL ，10.00 mL 于 4 只洁净干燥的 50mL容量瓶中，用 无水乙醇稀释至标线，摇匀。 3.2.3 、 绘制吸收光谱曲线 以无水乙醇为参比，在 220～ 320 nm范围测定维生素 C 和维生素 E的吸收光谱曲线，确定维生素 C和维生素 E的最大吸收波长λ max Vc 和λmax Ve ，分别作为 λ和λ。 1 2 3.2.4 、 绘制标准曲线 （ 1）维生素 C标准曲线：以无水乙醇为参比， 分别在波长 λ和λ 1 2 处测定 5 个维生素 C标准溶液的吸光度值。 （ 2）维生素 E 标准曲线：以无水乙醇为参比， 分别在波长 λ和λ 1 2 处测定 5 个维生素 E 标准溶液的吸光度值。 3.2.5. 、 未知液的测定 取未知液 5.00 mL 于 50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至标线，摇 匀. 在波长 λ和λ处分别测定其吸光度。 1 2 结束工作 1）