Y染色体微缺失与男性不育简介.ppt

染色体显带方法-G显带 染色体显带：经不同的方法处理染色体，经染色后使染色体在纵轴上显示明、暗或着色深、浅相间的横纹即显带（Banding）。 这种带对每一条染色体来说都是独特的，可以区分和确认每一条染色体。 多重PCR电泳检测法 男性不育的常规检测项目 1999年 欧洲男科学协会和欧洲遗传实验质控协会制定了Y染色体微缺失基因检测的第一份标准（指导原则） 初次建立标准阶段 确立标准阶段 2004年 欧洲男科学协会和欧洲遗传实验质控协会制定了Y染色体微缺失基因检测的第二份标准。 各自研究阶段 1995年 欧洲生殖医学实验室各自用自己的方法和标准进行检测 欧洲Y染色体微缺失分子诊断规范化历程 完善标准阶段 2013年 欧洲男科学协会和欧洲遗传实验质控协会在对之前标准进行进一步检验与完善后，制定了Y染色体微缺失基因检测的第三份标准。 推荐检测位点 AZFa: sY84、sY86 AZFb: sY127、sY134 AZFc: sY254、sY255 对照: SRY、ZFX/ZFY 各AZF区域检测位点 根据EAA/EMQN发布的2013版Y染色体微缺失检测指南报道，检测这6个位点能够诊断几乎所有临床相关及95％以上文献报道的AZF缺失情形，满足常规诊断需求。 是不是检测位点越多越好呢？ EAA/EMQN发布的2013版Y染色体微缺失检测指南中明确指出：检验过多位点的方法和试剂盒并不能提高检验的灵敏度，甚至可能会使结果解释复杂化。 6位点检测优势： Krausz, C., et al. EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Y‐chromosomal microdeletions: state‐of‐the‐art 2013.Andrology?2.1 (2014): 5-19.) 检测几个位点？ Y染色体微缺失检测产品 权威机构推荐标准 根据欧洲男科学会Y染色体微缺失诊断指南2013年版标准，Y染色体微缺失检测实验应设置如下： 检测位点 对照组设置 内参基因 ZFX/ZFY基因：检验样本是否正确提取，质量可靠 SRY基因：检验是否为男性样本 设置阳性对照(正常男性样本)、阴性对照(女性样本)与空白对照(水) 区域 AZFa AZFb AZFc STS sY84 sY86 sY127 sY134 sY254 sY255 检测方法 多重荧光PCR法，两管反应 1. 样本DNA抽提 2. 混合PCR体系 3. Real-time PCR 4. 直观结果 4 小时流程 小于1小时的手工操作时间 多通道实时荧光PCR 适用机型 大多数具有FAM、HEX／VIC、ROX、Cy5四检测通道的实时荧光PCR仪，例如：Roche LightCycler 480、ABI-7500、ABI-ViiA7、SLAN－96S/48P、TIB-8600 ? 样本要求 推荐样品类型顺序：新鲜外周血＞冷冻外周血 采血管选用非肝素抗凝管，推荐使用枸橼酸钠抗凝管和EDTA抗凝管 正常 男性标本 AZFa缺失标本 AZFb缺失标本 AZFc缺失标本 组别 荧光染料 检测位点 备注 Group A FAM SRY 对照 VIC sY84 AZFa ROX sY127 AZFb Cy5 sY255 AZFc Group B FAM ZFX/ZFY 对照 VIC sY86 AZFa ROX sY134 AZFb Cy5 sY254 AZFc 示例数据来源： 同一荧光通路检测同一AZF区域位点 彩色S曲线结果，简单直观 一份样本，两管反应，四道检测，六个位点 检验结果演示 关注问题：检测方法？ 电泳检测法 实时定量荧光PCR 产品优势 数字结果，彩色S曲线，简单直观 操作简单，自动化程度高 荧光检测，无需电泳，无污染 检测快速，时间4小时 肉眼判读，条带大小相近，图片模糊 操作复杂，人工实验较繁琐 电泳检测，接触EB等致癌物 电泳时间长，需8小时 多重PCR电泳检测法 多通道实时荧光PCR探针法 产品应用 男科（不育） 医院生殖遗传室 计划生育研究所 生殖医学中心 Y染色体微缺失检测 谢谢！ * * Y染色体微缺失的基因重组包括Y染色体自身重组及与常染色体之间。重复和回文序列多——联会 * 无精子症患者AZF缺失的发病率大于寡精子症患者，因此AZF缺失在不育男性中的发病率在不同的实验室可能会从2％-10％，甚至更高。而通常实验室接收的患者已经由外部机构的推荐，若不控制病人选择，发病率则较低，2％。 由图可见中国的比率高达11.5％，属于高频区域。 * 数据来源：阿周存, 杨元, 张思仲, 等. 中国无精症, 严重寡精症患者的染色体异常和 Y 染色体微缺失[J]. 遗