乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒(胶体金法)生产工艺研究及反应体系的建立研究资料.docxVIP

学海无涯苦作舟! 学海无涯苦作舟! 乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒（胶体金法） 生产工艺研究及反应体系的建立研究资料 目录 A、 研究择要 第2页 B、 缩略语 第5页 C、 正文 一、 .主要生产工艺描述及确定依据 第6页 二、 反应体系的组成 第16页 三、 被测样本的要求 第17页 四、 试剂用量 第19页 五、 体系的反应条件 第20页 六、 体系的有效性确定方法（校准、质控方法） 第21页 附图1乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒（胶体金法）生产工艺流程图 第 23页 A、研究择要 本检测试纸是由固相有纯化的高特异性鼠抗 HBsAg单克隆抗体A（检测线）和羊抗鼠 IgG多克隆抗体（对照线）的硝酸纤维素膜、吸附有胶体金标记抗HBsAg单克隆抗体B的 无纺布膜、玻璃纤维、吸水纸等其它辅料因此粘贴制成，用于定性的检测人血清 /血浆 中乙型肝炎病毒表面抗原。 当进行检测时，若为阳性标本，样本中的HBsAg与金标记的抗HBsAg抗体B结合形成复合物，此复合物由于层析作用沿试纸条向前移动， 则与检测线区固相的抗HBs抗体 A形成“固相抗HBsAg抗体A -HBsAg-金标记抗HBsAg抗体 B 双抗体夹心复合物而凝 聚显色；若为阴性标本，在检测线区域不能形成双抗体夹心复合物，因此不显色。 无论HBsAg是否存在于测试样本中，一条有色条带都会出现在对照线区内。 对照线 区内所显现的有色条带是判定是否有足够标本， 层析过程是否正常的标准，同时也作为 试剂的内控标准。若无对照线出现，则实验无效。 通过对样本用量、试剂用量、反应温度、质控方法等研究，建立制造工艺和质控方 法，确定本检测试纸的操作步骤、 结果判定以及注意事项等，最终建立生产工艺和反应 体系。 B、缩略语 编号 名词 缩略语 1 乙型肝炎病毒五项标志物 HBV 2 乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg 3 鼠抗HBs单克隆抗体 鼠抗HBs抗体 4 羊抗鼠IgG多克隆抗体 GAM C正文 1、主要生产工艺过程 1.1金标抗体反应膜制备 1.1.1参数设置 表1胶体金标记参数 A104 胶体金—CG（单位：g/ml） A103 最适OD值 配对宽度（mm 原料名称 最适标记量 0.8 % 鼠抗HBsAg单克隆抗体B 15 0.4% 35 7.5 ± 1 1.1.2金标反应膜制备/ HBSAg） 表2金标反应膜清单 物料编码 辅料名称 规格 批配料量（1000板） F-002-3 无纺布 38cmX 27cm 30张 Y-002/ HBsAg 鼠抗HBsAg单克隆抗体B / 120mg 注：（1）Y-002/ HBsAg 的包装规格可以不同，但是总量一定。 （2） 此规格每张有效长度均以 34cm计，折合34板（每板宽度1cm）。 1.1.2.1胶体金溶液制备 在加热煮沸的3800ml纯化水中快速加入 A102溶液80ml，待溶液再次沸腾后，迅 速加入A101溶液80ml，继续煮沸，观察溶液颜色由黄色变黑再变紫，最后变成稳定的 酒红色后，计时继续加热10分钟即可。待溶液冷却至室温后，加入纯化水补充至4000ml。 共制备2瓶。 备注：每1000板需要该比例胶体金溶液的体积为 8000毫升。 1.1.2.2胶体金-抗体结合物制备： 标记原料：鼠抗HBs单克隆抗体B （Y-002/ HBsAg） 每4000ml胶体金溶液，首先加入32ml A104,混匀，将上述胶体金溶液按照15卩g/ml 的比例加入 Y-002/ HBsAg（即每1000ml需要Y-002/ HBsAg的重量为15mg）,混匀，静 置5分钟，然后加入A103溶液16ml，混匀，静置5分钟。经3次30分钟的离心，离 心速度为：5000rpm 7000rpm 9000rpm,合并三次收集的沉淀（体积V。 1.123金标反应膜制备 合并沉淀体积为 V，取30ul沉淀100倍稀释测 524nmOD值A(A0.5),按 100A*V=35*V2加金标结合物稀释液稀释沉淀至体积 V即制得金标抗体溶液；将制得的 金标抗体溶液按每张无纺布涂布 10ml均匀涂布，室温晾干18- 20小时即可。 1.1.2.4 分切 将晾干的金标反应膜按照中间体配对确定的宽度进行分切 (通常7.5 ± 1 mm)记做 生产中间体条组分S4铝箔袋密封，室温存放。 1.2硝酸纤维反应膜制备 表3包被参数 检测线—T(单位：mg/ml) 对照线—C(单位：mg/ml) 原料名称 稀释浓度 原料名称 稀释浓度 鼠抗HBsAg单克隆抗体A Y— 001/ HBsAg 1.5 羊抗鼠IgG多克隆抗体 Y— 003/GAM 1.0 表4硝酸纤维素膜固相准备 物料编码 辅料名称 规格 批配料量(1000板) F-001-3 硝酸纤维膜