RNA提取关键技术.docVIP

1．提取 称取鲜酵母 159或干酵母粉 2.5g，倒入 100ml三角瓶中，加 NaCl 2.5g，水25ml，搅拌均匀，置于沸水浴中提取lh。 2．分离 将上述提取液用自来水冷却后，装入大离心管内，以4000r／min离心10min，使提取液和菌体残渣等分离。 3．沉淀RNA 将离心得到上清液倾于50ml烧杯内，并置入放有冰块250ml烧杯中冷却．待冷至10℃ 4．洗涤和抽滤 上述悬浮液以 4000r／min离心 10min，得到 RNA沉淀。将沉淀物放在 10ml小烧杯内，用95％乙醇 5～10ml充足搅拌洗涤，然后在布氏漏斗上用射水泵抽气过滤，再用 95％乙醇5～10ml淋洗 3次。 5．干燥 从布氏漏斗上取下沉淀物，放在6cm表面皿上，铺成薄层，置于80℃ （二）植物总RNA提取（1）65°C水浴中预热15 mL CTAB提取液。（2）液氮中研磨2～3 g新鲜或-70°C冷冻材料。（3）转移样品至有CTAB提取液离心管中，立即猛烈涡旋30s，短时放回 65°C水浴中（4～5 min）。（4）加入等体积氯仿/异戊醇并涡旋混合，10000 rpm常温离心15 min。（5）将上清转移至一新离心管。反复抽提一次。（6）将上清转移至一新离心管中，加入8 mol/L LiCl, 使LiCl终浓度为2 mol·L-1，即加入1/3体积LiCl，4°C下沉淀过夜（最多