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文档来源为 :从网络收集整理 .word 版本可编辑 .欢迎下载支持 . 培养基制备实验报告 篇一：培养基的制备与灭菌实验报告 陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学 号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心 培养基的制备与灭菌 一、目的要求 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 掌握培养基的配置原则和方法。 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又 称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖 所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 文档来源为 :从网络收集整理 .word 版本可编辑 .欢迎下载支持 . 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出， 压力增大，沸点升高，获得高于 100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 药品：牛肉膏、 蛋白胨、 NaCl、琼脂、1mol/L 的 NaOH 和 HCl 溶液。 仪器及玻璃器皿： 天平、高压蒸汽灭菌锅、 移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 其他物品：药匙、称量纸、 pH 试纸、记号笔、棉花 等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培 养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用 自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再 文档来源为 :从网络收集整理 .word 版本可编辑 .欢迎下载支持 . 用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘 干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 1） 培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 2） 移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花 ( 勿用脱脂棉 ) ，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入 口中。塞入此小段棉花应距管口约 0.5cm 左右，棉花自身长度约 1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约 5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端 放在长条报纸的一端， 约成 45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓 转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程 文档来源为 :从网络收集整理 .word 版本可编辑 .欢迎下载支持 . 1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制 1000ml 培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取 3.0g 牛肉膏、 10.0 g 蛋白胨、 5.0gNaCl 放入烧杯 （或 1000ml 刻度搪瓷杯） 中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约 700ml ），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全 溶解后，补充水到所需的总体积（ 1000ml ）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 3）调 pH 调 pH：一般用 pH 试纸测定培养基的 pH。用剪刀剪出一小段 pH 试纸，然后用镊子夹取此段 pH 试纸，在培养基中蘸一下，观看其 pH 范围，如培养基偏酸或偏碱时， 可用 1mol/L NaoH或 1mol/L HCl 溶液进行调节。调节 pH 时，应逐滴加入 NaOH或 HCI 溶液，防止局部过酸或过碱， 破坏培养基中成分。 边加边搅拌，并不时用 pH 试纸测试，直至 pH 达 7.4-7.6 。 反之，用 1mol／ LHCl 进行调节。 2．固体培养基的配制 文档来源为 :从网络收集整理 .word 版本可编辑 .欢迎下载支持 . 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸， 再将称好的琼脂 (1.5~2 ％ ) 加 入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼 脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。 （三）培养基的分装 根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶 内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。 如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小 块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃