沙门菌血清学检测标准操作规程.docxVIP

沙门菌血清学检测标准操作规程 1．目的 规范沙门菌的血清学检测标准操作规程。 2．原理 用已知的沙门菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养 物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该 菌即为沙门菌。 3．试剂 沙门菌诊断血清，生理盐水。 4．质控 伤寒沙门菌 ATCC50096 阳性；大肠埃希菌 ATCC25922 阴性。 5.操作步骤 5.1 首先用可疑菌与沙门菌 O 多价血清 (A-F) 进行凝集， 若呈明显凝集，提示被检菌株可能属于 A-F6 个 O 群范围之 内，再用 H 因子血清第一相 （特异相） 定型，最后用 H 因子 第二相（非特异相）辅助定型。 5.2 若生化反应符合沙门菌，但 A-F 多价血清不凝集，首先考虑是否存在表面抗原（ Vi 抗原），因为 Vi 抗原能阻断 抗原与相应抗体发生凝集，加热可将其破坏。应将细菌制成菌悬液，放入沸水中加热 15～ 30 分钟，冷却后再次做凝 集试验。 若去除 Vi 抗原后仍不凝集， 此时应考虑是否为 A-F 以外菌群，应送专业实验室进行鉴定。 6.结果判断 阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。阳性：对照一侧 均为混浊，试验一侧明显凝集。自凝：试验一侧及对照一侧 凝集。 7.注意事项 伤寒沙门菌菌体表面常有一层 Vi 抗原。它能阻抑菌体抗 原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液 于 100℃中煮沸 1 小时，