常见内参基因.pdfVIP

β - A c t i n Actin 即 “肌动蛋白 ”，是 细胞 的一种重要骨架蛋白。同时 Actin 在细胞分泌、吞噬、 β-Actin 移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。 Actin 在不同物种之间高度保守，以至于 很难获得较好的针对 actin 的抗血清。 Actin 大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特 异性的，包括 α-skeletalmuscleactin ， α-cardiacmuscleactin ， α-smoothmuscleactin ，和 γ-smoothmuscleactin ；其余两种广泛分布于各种组织中，包括 β-actin( β-non-muscle) 和 γ-non-muscleactin 。不同的 actin 之间同源性大于 90% ，但在 N-terminal 同源性仅 50%-60% ， 因此 N-terminal 常被用作 actin 的抗原 。β-Actin 是 横纹肌 肌纤维中的一种主要 蛋白质 成分， 也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能，分布广泛。 β-Actin 用途 β-Actin 是 PCR 常用的内参， β-Actin 抗体是 WesternBlot 很好的内参指数。内参即是内部 参照 （InternalControl ），对于 哺乳动物细胞 表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。 它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。 常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-tubulin 和 GAPDH （glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase ）等。因此 β-Actin 抗体、 β-Tubulin 抗体以 及 GAPDH 抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。 β-Actin 作为内参是得到了公认的， 这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。 Beta-actin 由375 个氨基酸组成，分子量大小为 42-43kDa 左右。 β-actin 的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于 Western 时上样量是否一致的 参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用作 Western 的参照时， Actin 抗体和 Tubulin 抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照 在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。 GAPDH GAPDH 或 G3PDH 是 甘油醛 -3- 磷酸脱氢酶 （glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase ）的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个 酶，由 4个30 －40kDa 的亚基组成，分子量 146kDa 。该酶基因为管家（ housekeeping ）基 因，几乎在所有组织中都高水平表达， 在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的， 且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提 totalRNA ，poly(A)+RNA ，Westernblot 等实验操作的标准化的内参。 GAPDH结构图 常用的内参有， ACTB （β-actin 、 β-肌动蛋白）、 GAPDH 或 18S 等。目的是在于避免 RNA 定量误差、加样误差以及各 PCR 反应体系中扩增效率不均一、各孔间的温差等所造成的误 差、这些都是 管家基因 ，在各个组织中的表达量相对稳定， 其中 18S 同整个基因谱有关 （负 责