HisTag 表达蛋白纯化原理、方法和问题分析.pptxVIP

组氨酸标签蛋白的纯化 His-Tag 融合蛋白是目前最常见的表达方式，而且很成熟，它的优点是表达方便 而且基本不影响蛋白的活性，无论是表达的蛋白是可溶性的或者包涵体都可以用 固定金属离子亲和色谱去（IMAC）纯化。 IMAC(ImmobilizedMetal-ionaffinitychromatography)是 Porathetal.1975 年用固定 IDA 作为配基的填料螯合过渡金属铜、镍、钴或锌离子，可以吸附纯化 表面带组氨酸、色氨酸或半胱氨酸残基的蛋白，1987 年 Smithetal.发现带有几 个组氨酸或色氨酸小肽和螯合金属离子的 IDA-sephadexG-25 作用力更强，此前 在 1986 年他和他的合作者用 Ni2+-IDA-sephadexG-25 亲和纯化在氨基端带组氨 酸和色氨酸的胰岛素原。同年 1987 年 Hochulietal.发现带有相连组氨酸的多肽 和 Ni2+-NTA 填料作用力更强于普通的肽，1988 年他第一次用这样的方法纯化了 带六个组氨酸标签的多肽，无论是在天然还是变性条件下一次亲和纯化都得到很 好效果，此后表达带六个组氨酸标签的蛋白配合 IMAC 变得非常普遍，相对而言， 不带标签的蛋白纯化就非常困难，所以表达带六个组氨酸标签的蛋白配合 IMAC 纯化变成最常用而且最有效的研究蛋白结构和功能的有力手段。1986 年 Por