DNA的提取及保存方法总结计划.docxVIP

1． -20  度冻存  1 年是没有问题的，当然越低越好。但是冻存后，用蛋白酶  K 法，红细胞不 易裂解，必须采用特殊方法裂解。 2．建议裂解红细胞后再冻存于－ 80 度。因为冻融后红细胞会裂解，而且红细胞会增加蛋白 污染，影响 DNA 抽提 3．我们实验室加 ACD 抗凝血液， 保存 3 年了，抽提 DNA 没问题（我们是先离心后分层  保 存，以便后续试验） ！ 血 DNA 提取技术 分离外周血白细胞提取方法：试验步骤： 1、取人肘静脉血 5ml ， EDTA  抗凝，  2500rpm  离心  10min 。 2、小心吸取上层血浆，分装到  3 个  0.5ml  离心管中。 3、在血细胞中加入  3 倍体积的溶血液，摇匀，冰浴  15min 。 4、 2500rpm 离心 10min ，弃上清。 5、加入 10ml 溶血液，摇匀，冰浴 15min 。 6、 3000rpm 离心 10min ，弃上清。 7、倒置离心管，去掉残液。 8、得白细胞，－ 80?C 冻存。 试验要求： 血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过 2h， 4℃放置不超过 5h，以防白细胞自溶。 氯仿法抽提外周血白细胞基因组试验试剂：  DNA ： Ligsisbuffer  ： 133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.07