蛋白泛素化检测.pdfVIP

解螺旋 陪伴医生科研成长 蛋白泛素化检测 （IP-WB 法） 1. 实验原理 泛素（ubiquitin，Ub）是真核细胞内广泛存在的一种高度保守的蛋白质。它和泛素激 活酶（E1）、泛素结合酶（E2）、泛素连接酶（E3）配合实现对特定蛋白的泛素化修饰，最终 达到清除衰老、损伤以及错误折叠的蛋白质, 对维持细胞正常的生理功能具有非常重要的作 用。另外,某些泛素化修饰反应也能够实现与蛋白质降解无关的功能调控作用。 IP-WB 法通过免疫共沉淀方法将目标蛋白以及与其结合的蛋白分离出来。分离出来的蛋 白再进行SDS 电泳和western blot 分析。 2. 实验目的 检测目标蛋白P 的泛素化 3. 实验材料 3.1. 主要试剂 目标蛋白抗体（若是带有标签，也可用标签抗体）、Protein A beads、Protein B beads、 HA 标签抗体或泛素抗体、蛋白酶抑制剂等. 解螺旋/ 3.2. 主要仪器 离心机、恒温金属浴、酶标仪、电泳仪、凝胶成像系统、Vortex 等 3.3. 其他（请具