植物组培2-愈伤组织的诱导.doc

植物组织培养-愈伤组织的诱导 一、【实验目的】 掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理。 二、【实验原理】 植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。 超净工作台工作原理： 本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备 室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速） →不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境 三、【实验仪器和材料】 仪器：培养室，高压灭菌锅， 水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（ 100mL ）， 烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析 天平，长镊子， 剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸 试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基 、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 材料：绿豆、胡萝卜、自选材料 四、【实验步骤】 （1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。 （2）将植物体用自来水冲洗后,用酒精棉擦拭欲取材部位表面, 或于70%酒精中浸沾数秒钟。 （3）将材料放入已灭菌的100ml烧杯（或试剂瓶）中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。 （4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。 （5）弃次氯酸钠浸泡液，用无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。 （6）将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm厚的薄片，弃去两头的两片，取中间 部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散，以绿豆为材料时，将绿豆纵切或横切，去皮后分别接种。 （7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。 （8）在培养瓶下部的培养基高度位置作记号。 （9）将接种后的三角瓶，培养于25℃光照条件下（烟草可用弱光），20天左右外植体逐渐膨大形成愈伤组织，愈伤组织的形成标志着接种的外植体已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。 无菌器皿、用具的准备： 将解剖刀及镊子放入95%的酒精中浸泡片刻，用干棉球蘸取95%的酒精擦拭盘子、解剖刀及镊子，将酒精挤在盘子 上，然后引燃火，（引火棉球立即放入培养皿中加盖熄火）使盘子、解剖刀及镊子灼烧后冷却。 五、【实验结果及讨论】 实验选择了绿豆和萝卜作为实验材料，切块放在一个培养瓶中培养，其中萝卜组织共六块（3mm×3mm×3mm）,绿豆组织共两块（2mm×2mm×2mm），实验现象如下 一周后：有些萝卜组织表层出现少量愈伤组织，开始了脱分化；绿豆组织没有明显脱分化现象出现。 两周后：萝卜组织表层组织进一步脱分化，愈伤组织较一周前有增多，组织块颜色变浅，有白化趋势；绿豆组织仍不明显，或不易用肉眼观察。 三周后：所有萝卜组织表层都脱分化成为愈伤组织，但量少，组织颜色进一步白化，变为淡肉色；绿豆组织脱分化现象仍不明显。 若干周后：所有萝卜组织表层的脱分化进行缓慢，几乎保持不变，而颜色也逐渐变淡，但仍然变化缓慢；绿豆组织 仍不明显或不能用肉眼分辨。 萝卜愈伤组织萝卜愈伤组织萝卜愈伤组织绿豆相关图片如下： 萝卜愈伤组织 萝卜愈伤组织 萝卜愈伤组织 绿豆 萝卜愈伤组织 萝卜愈伤组织 六、【实验注意事项】 1、所有的东西都要即时标记好，日期，名称，浓度等(标注可以组别-姓名，如1-姓名或1-姓名单字母缩写） 2、自己用过的器皿要自己洗刷，并灭菌，以备下组同学使用。 3、实验结束后用过的仪器等恢复原样，清洁实验台面，一切东西归位。 七、【思考题】 1. 以大组总瓶数为样本总数，每瓶为样本个体统计记录愈伤组织诱导培养的出愈率、污染率和其他现象。并简述本人的培养结果或现象。 答：我组共十人，统计结果如下 污染6人，愈伤组织明显2人，愈伤组织不明显2人 本人培养的植物组织块较小，仔细观察萝卜块，能