沙门菌属及志贺菌属检验.docx

沙门菌属和志贺菌属检验 步骤和方法 1．形态观察 (1)革兰染色：沙门菌属细菌为革兰阴性细长杆菌。志贺菌属细菌为革兰阴性杆菌，散在分布。 (2)观察鞭毛染色标本片：镜下可见沙门菌属细菌具有周鞭毛。志贺菌属细菌无鞭毛。 2．菌落观察 (1) 沙门菌属：将本菌接种在 SS、MAC 平板上经 35℃孵育 18～ 24h。由于本菌不分解乳糖并产碱， 故在 SS 和 MAC 平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生 H2S 的菌落可在 SS 平板上形成中心带黑褐色的小菌落。 (2) 志贺菌属：将本菌接种在 SS 和 MAC 平板上经 35℃孵育 18～ 24h。由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些 菌株可迟缓发酵乳糖， 故其在 SS 平板和 MAC 平板上形成无色透明的、 中等大小的菌落。 除宋内志贺菌菌落外均为光滑 型菌落。 3．生化反应 氧化酶试验：方法同大肠埃希菌。沙门菌属和志贺菌属细菌氧化酶试验均为阴性。初步试验鉴定：挑取志贺菌和沙门菌 的单个菌落分别接种在 KIA 、 MIU 和硝酸盐培养基上，经 35℃孵育 18～ 24h，同时做触酶试验。其结果见表 2— 4。 表 2-4 志贺菌属和沙门菌属的基本生化反应 KIA MIU 斜面 底层 产气 H2S动力 吲哚 脲酶 氧化酶 触酶 硝酸盐还原 志贺菌 K A -/+ - - +/- - - + + 伤寒沙门菌 K A - +/- + - - - + + 乙型副伤寒菌 K A + + + - - - + + 最终鉴定：须做全面生化反应和血清学试验。 4．血清学试验 (1)志贺菌属的分型鉴定：凡生化反应符合志贺菌属者均需做血清学鉴定。取  1 环志贺菌四种多价血清于载玻片一 端，再取少许待测菌与之混合，同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照。结果：对照呈均匀混浊，待检菌与志 贺菌四种多价血清混合后，数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性。继之用  A 、B、C、D 群最常见的单价血清 凝集定种。 结果判断、解释和报告： ①分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告  “未分离到志贺菌属细菌  ”。 ②经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报告 “分离出 ××志贺菌 ”，若进一步做多种生化反应及因子血清分型后，可 报告： “分离出 ××志贺菌 ×型 ”。 (2)沙门菌属的分型鉴定：如果生化反应及形态学检查疑为沙门菌，可选用沙门菌的多价诊断血清进行玻片凝集。 首先选用  A～ F 组多价 “ O诊”断血清做玻片凝集试验。在试验时应以生理盐水作对照。血清凝集试验在  5～10min  内不出 现凝集者可确定为阴性。但若生化反应比较典型，应考虑选用  Vi  凝集试验。若凝集，则用无菌生理盐水将菌洗下，制 成浓厚的悬液，加热  100℃、 30min ，再与  A～ F 组多价 “ O诊”断血清做凝集试验。若与  A ～ F 组多价 “ O血”清发生凝集， 应再与沙门菌单价因子血清分别做玻片凝集试验，以确定该菌株属于哪一组。一般先选用本地区检出率最高菌型的相应 血清做玻片凝集反应。 若已确定哪一沙门菌种后，再分别先用 H 因子血清检查第 I 相抗原，然后检查第Ⅱ相抗原，最后确定该菌种属于 哪一型沙门菌。 结果判断、解释和报告： ①分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌属细菌鉴定依据者，可报告 “未分离出沙门菌 ”。 ②生化反应符合沙门菌、玻片凝集试验结果阳性，可初步报告为： “分离到 ××沙门菌 ”，或 “×群沙门菌 ”。 5．肥达试验 (1)原理：用已知的伤寒沙门菌  O、H 抗原，甲、乙型副伤寒沙门菌的  H 抗原 (PA 、PB)与肠热症患者血清做定量 试管凝集试验，以出现  “ 2+凝”集的最高血清稀释度为效价，测定相应抗体含量，用以辅助诊断肠热症。 (2)试验方法：为单管稀释法。准备  4 排小试管，每排  7 支并标记，另取中号试管  1 支，加生理盐水  3．8ml 及被 检血清 O．2ml ，混匀，即为 1：20 稀释，总量为 4ml。然后取出 2ml 按每管 0.5m1 分别放人各排小试管中的第 中。再于上述中号试管内加生理盐水 2ml 混匀，此种血清即为 1：40 稀释，吸取此稀释度血清 2ml ，按每管 加到各排小试管中的第 2 支试管中。以此类推连续稀释到各排小试管第 6 支试管为止，第 7 支小试管只加入  1 支试管 0.5m1 分别 0.5ml 生理 盐水做阴性对照。然后按表  2-5 操作。 表 2-5  血清学试验  (肥达试验  )方法 试验管 ( 每管  0.5ml  稀释血清 )  对照管 1： 20 1：40 1： 80 1： 160 1：320