植株生理生长指标的测定.pdfVIP

根系活力的测定（TTC 法） 植株根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接 影响地上部分的生长 营养状况及产量水平。 一、原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化 电位为 80mV 的氧化还原色素，溶 于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的 三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛地用作酶 试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸，延 胡索酸，苹果酸得到增 ，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC 还原量能表 示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。 二、材料 设备仪器及试剂 （一）材料 水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 （二）仪器设备 1. 分光光度计；2. 分析天平（感量 0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量 0.1g）； 4. 温箱；5. 研钵 ；6. 三角瓶 50ml ；7. 漏斗；8. 量筒 100ml ；9. 吸量管 10ml ； 10. 刻度试管 10ml ；11. 试管架；12. 容量瓶 10ml ；13. 药勺；14. 石英砂适量； 15. 烧杯 10ml 1000ml。 （三）试剂 1、乙酸乙酯（分析纯）。 2、次硫酸钠（Na S O ），分析纯，粉末。 2 2 4 3 1％TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0g，溶于少量水中。定容到 100ml。 4 0.4％TTC 溶液：准确称取 TTC 0.4g，溶于少量水中。定容到 100ml。 5、磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7）： 6 1mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55ml，边搅拌边加入盛有 500ml 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000ml。 7 0.4mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72g，溶于水中，定容至 100ml 即成。 三 实验步骤 1、定性测定 （1）配制反应液：把 1%TTC 溶液 0.4 mol/L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除。将根放入三角瓶中，倒入反 应液，以浸没根为度，置 37℃左右暗处放 1~3h，以观察着色情况，新根尖端 几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。 2、定量测定 （1）TTC 标准曲线的制作 取 0.4％TTC 溶液 0.2ml 放入 10ml 量瓶中，加少许 Na S O 粉摇匀后立 2 2 4 即产生红色的甲腙。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液 0.25ml 0.50ml 1.00ml 1.50ml 2.00ml 置 10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至 刻度，即得到含甲腙 25μg 50μg 100μg 150μg 200μg 的标准比色系列，以 空白作参比，在 485nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 （2）称取根尖样品 0.5g，放入 10ml 烧杯中，加入 0.4％TTC 溶液和磷酸缓 冲液的等量混合液 10ml，把根充分浸没在溶液内，在 37℃下暗保温 1～3h， 此后加入 1mol/L 硫酸 2ml，以停止反应（与此同时做一空白实验，先加硫酸， 再加根样品，其他操作同上）。 （3）把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯 3～4ml 和少量石英砂一起在研钵 内磨碎，以提出甲月替。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗 涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为 10ml，用分光光度计在 波长 485nm 下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出 四氮唑还原量。 四 结果计算 C 单位质量鲜根的四氮唑还原