干旱胁迫对植物逆境生理生化指标的影响..docx

干旱胁迫对植物生理生化指标的影响 摘要：本文以实验室提供的小麦种子作为材料，在实验室种植，评估小麦种子发芽率，并利用 PEG 模拟小麦干旱胁迫，通过紫外分光光度计法测定小麦幼苗各生理生化指标综合评价干旱胁迫对小麦生理生化的影响，实验发现，干旱胁迫下，小麦幼苗抗氧化酶系统、脯氨酸、过氧化氢、丙二醛等含量均明显增加，表现出有效的抗旱效应，说明在干旱胁迫下，植物能够通过合成自身所需的以上物质来达到抗旱的作用，而且这些物质可以作为植物抗旱指标来对植株进行抗旱性评价。 关键词：玉米种子小麦幼苗发芽率抗氧化酶 (POD 脯氨酸（ pro ）丙二醛 MDA ）H 2O 2 引言：虽然地球上的有 70%的水分覆盖，但是能够真正的被人类利用的水资源却很少。近年来，由于环境的恶化以及温室效应的加剧，越来越多的地方出现干旱现象，由于缺水而导致粮食产量的减少，我们需要提高农作物的抗旱性，从而减少生产用水。小麦是世界上总产量排名第二的粮食作物，因此研究小麦抗旱性，对于实现小麦水资源高效利用和农业可持续发展具有重要意义；通过测定作物抗旱指标可以确定植物的抗旱能力，前人有关小麦抗旱性的研究，围绕抗旱性评价指标、抗旱生理指标等已有较多报道，本实验通过利用前人的研究方法测定小麦多个生理指标进而对这批小麦种子抗旱性综合评价。 一、材料： 玉米种子 小麦种子 小麦幼苗 二、 方法： （1）、取 50 粒吸胀的玉米种子或小麦种子 →沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒），进行下列实验： 其中 50 个半粒进行 TTC 染色（ 30℃ 水浴 20 min ） 另 50 个半粒进行曙红染色（室温染色 10 min）→ 洗净后观察。 （2）、 Pro 的提取：分别取 0.1 g 实验组和对照组的幼苗 →加入 3 mL 3%磺基水杨酸（ SSA ）和少许石英砂 → 充分研磨 →用 2 mL 3% SSA 洗研钵 →5000 rpm 离 心 10 min →上清液定容至 5 mL。测定：上清液各 2 mL →分别加入 ( 2 mL 冰乙酸和 2 mL 茚三酮试剂 →煮沸 15 min →冷却后 →5000 rpm 离心 10 min（若没沉淀可略此步骤） → 分别测定 A520 计算： （3）MDA 提取：分别取 0.1 g 实验组和对照组 →加入 3 mL 0.1% TCA 和少许石英砂 → 充分研磨 →用 2 mL 0.1%TCA 洗研钵 →5000 rpm 离心 10 min →量上清液体积。测定：分别取上清液各 1 mL →加入 0.6%TBA （用 10%TCA 配制） 3 mL → 煮沸 15 min →冷却后 →5000 rpm 离心 5 min （视沉淀有无） → 分别测定 OD450 和 OD532 （4）、 H2O2 提取：分别取 0.1 g 实验组和对照组 → 加入 3 mL 50 mM PBS ( 提取液， pH=6.8，内含 1mM HA 和少许石英砂用总显 V V V W L A ???? ε520Pro content = ( μ mol-1FW.g →充分研磨 →用 2 mL PBS 洗研钵 → 5000 rpm 离心 10 min →上清液定容至 5 mL 。测定：分别取上清液各 3 mL →加入 0.1%Ti(SO42 [用 20%(v/v H2SO4 配制 ] 1 mL→ 摇匀 → 5000 rpm 离心 10 min → OD410 计算： （5）抗氧化酶的提取：分别取 0.1 g 实验材料 →加入少许石英砂和 3 ml 提取液（ 50mmol/L PBS, pH6.0, 内含 0. １mmol/ LEDTA, 1%PVP ） → 充分研磨 →转入离心管中 →用 2 ml 提取液洗研钵 → 5000 rpm 离心 10 min →上清液定容至 5 ml → 用于测定 POD 和 PPO 酶活性或分装后转至 -20 或-80℃保存。 2、POD 测定：取 POD 反应混合液（ 10 mmol/L 愈创木酚， 5 mmol/L H2O2, 用 PBS 溶解） 2.95 ml，加入酶液 50 ml（空白调零用 PBS 取代），立即记时，摇匀，读出反应 2 min 时的 A470。 3、PPO 测定：取 PPO 反应混合液（ 20 mmol/L 邻苯二酚，用 PBS 溶解） 2.9 ml ，加入酶液 0.1 ml（空白调零用 PBS 取代），立即记时，摇匀，读出反应 2 min 时的 A410。 以每分钟 A 值变化 0.01 所需要的酶液的量为一个活力单位（ U ），则： 4、计算： 用 总显 V V V W L A ???? ε410H 2O 2 content = ( μmol-1FW.g 三、 结果与分析 1、 种子发芽率的测定 实