BcrAbl融合基因荧光定量RTPCR诊断试剂盒说明书.pdfVIP

PML/RARα 融合基因荧光 RT-PCR诊断试剂盒 一、 试剂盒采用荧光定量 RT-PCR方法，快速、特异、灵敏、定量地检测临床白血病标本中 PML/RARα 融合基因的情 况 , 约有 90%的急性早幼粒细胞白血病患者骨髓细胞和血细胞中会出现 PML/RARα 融合基因。 因此检测 PML/RARα 融 合基因已成为诊断急性早幼粒细胞白血病以及治疗后追踪残余白血病细胞的主要依据。 二、试剂盒组成 (20 人份 ) RNA提取液 （20ml / 瓶） 1 瓶 Taq 酶 （40 μl / 管） 1 管 反应液 I （ 165μl / 1 管 定量标准品 （50 μl / 管） 8 管 管） 2 反应液 II （165μl / 管） 1 管 DEPC HO （500 μl / 管） 1 管 反应液Ⅲ （350 μl / 管） 1 管 去离子水 （1100 μl / 1 管 管） 逆转录酶 （25 μl / 管） 1 管 三、检测步骤 1．标本采集 抽取外周血 5ml 抗凝后密封送检，或 3ml 新鲜骨髓标本密封送检。 2．标本处理 将 5ml 抗凝外周血或 3ml 骨髓加入等体积生理盐水稀释， 取 10ml 离心管， 先加入 2ml 淋巴细胞分离液， 再取稀 释好的标本 5ml 沿管壁缓慢加入， 4℃静置 5 分钟后，2,000rpm 离心 15 分钟，小心吸取白细胞层于 1.5ml 离心管中， 离心留沉淀，用生理盐水洗沉淀一次，沉淀加入 0.5ml RNA提取液，充分混匀。室温静置 5 分钟，加入 0.2ml 氯仿， 盖上管盖，用力振摇 15 秒， 4℃静置 2-3 分钟， 4 ℃ 12,000rpm 离心 15 分钟， 离心后反应管分三层，底层为微黄 色的氯仿层，中间层及无色水相上层，水相上层的体积一般为提取液体积的 60%。小心将上层水相转移至灭菌的离 心管中，加等体积异丙醇 4 ℃静置 10 分钟，然后 4℃， 12,000rpm 离心 10 分钟，离心前通常看不见 RNA沉淀，离心 后可见胶状沉淀。去上清，加入 400 μl 75% 的乙醇洗涤 RNA沉淀，混匀， 4℃ 7,000 rpm 离心 5 分钟，小心吸去大 2 部分乙醇。将沉淀在室温空气中干燥 10 分钟。 ( 注： 75% 乙醇配制时须用试剂盒中提供的 DEPCH O）。用 40 μl DEPC H2O溶解沉淀，吸出部分溶液，测 A260-A280 处的吸光值，并计算 RNA含量。 3．逆转录反应：取灭菌 0.5ml 离心管 , 按以下要求配备逆转录体系 2 反应液 I 逆转录酶 模板（ RNA） DEPC HO 总反应体积 6.5 μl 1 μl 2