高二生物选修学案基因综合项目工程概述.doc

-第二学期氾水高级中学高二生物（选修）学案（1） 主备人 陈军 课题 选修三 §1.1基因工程概述 完成日期 3.18 学习目标：1、说出基因工程概念（A）2、简述基因工程诞生历程（A）3、说出DNA重组技术所需三种基因工具作用（A）4、简述基因工程基础操作程序四个步骤（B） [预习知识] 预习书本P8-P18 一、基因工程概念 是指在体外经过人工“ ”和“ ”等方法，对生物基因进行 和 ，然后 受体细胞并使重组基因在受体细胞中 ，产生人类所需基因 技术。 （1）操作环境： （2）操作对象： （3）操作水平： 水平 （4）基础过程： → → → （5）结果：人类需要 二、基因工程工具及作用 （一） （简称限制酶）------“分子手术刀” 1、起源：关键是从 生物中分离纯化出来。 2、作用：能够识别 DNA分子某种 核苷酸序列，而且使每一条链中 部位两个核苷酸之间 断开。 3、特点:含有 ，表现在两个方面： ①识别双链DNA分子某种 核苷酸 。 ②切割 序列中 位点。 4、结果：经限制酶切割产生DNA片段末端通常有两种形式： 末端和 末端。 [预习习题检验] 　 例1、下列相关基因工程中限制内切酶描述，错误是（ ） A．一个限制性内切酶只能识别一个特定脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶活性受温度影响 C．限制性内切酶能别和切割RNA D．限制性内切酶可从原核生物中提取 [预习疑难问题] 问题1: [重难点点拨] （二） ------“分子针线” 1、分类：依据酶起源不一样，可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类 2、作用：恢复被限制酶切开了两个核苷酸之间磷酸二酯键。 【疑难解析】 1、两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)比较： （1）相同点：全部缝合磷酸二酯键 （2）区分：E．coIiDNA连接酶起源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶起源于T4噬菌体能缝合两种末端，但连接平末端之间效率较低。 2、DNA连接酶和DNA聚合酶作用比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 不一样点 连接DNA 链 链 模板 模板 模板 连接对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成 化学本质 (三) “分子运输车” 1、载体作用：载体是基因运输工具，在基因操作过程中，使用载体有两个目标：一是用它作为运载工具，将目标基因送到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目标基因进行大量复制。 2、载体必需含有三个条件： （1）能在受体细胞中复制并稳定保留。 （2）含有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入。 （3）含有一些标识基因，方便进行筛选。 3、载体种类： 、 和 等。 最早应用最常应用载体是质粒，它是细菌细胞中一个很小双链环状DNA分子。 三、基因工程基础过程 (一) 取得 （目标基因获取） 1、获取方法关键有两种：（1）从自然界中已经有物种中分离出来，如可从基因文库中获取。（2）用人工方法合成。 ★取得原核细胞目标基因可采取直接分离，获取真核细胞目标基因通常是人工合成。 ★人工合成目标基因常见方法有反转录法和化学合成法。 2、利用PCR技术扩增目标基因 （1）PCR含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段核酸合成技术。 （2）目标：获取大量目标基因 （3）原理：DNA双链复制 （4）过程：第一步：加热至90～95℃ DNA解链为单链； 第二步：冷却到55～60℃，引物和两条单链DNA结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链合成。 （5）特点：指数形式扩增 (二)制备重组DNA分子(基因表示载体构建) 1、重组DNA分子组成：除了目标基因外，还必需有标识基因。 ★标识基因作用：判定受体细胞中是否含有目标基因，从而将含有目标基因细胞筛选出来。 2、方法：同种限制酶分别切割载体和目标基因，再用DNA连接酶把二者连接。 (三)转化受体细胞(将目标基因导入受