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《动物胚胎工程实验教程》;2;;4;5;6;7;2.1 取精子
选取性成熟(8 周)昆明白雄鼠,已通过交配实验证明其有受精能
力,颈椎脱臼法杀雄鼠,打开腹腔,将附睾尾部和输精管剪下,剔除脂肪, 在实体显微镜下,用镊子和针头配合,挤出输精管内精子,针头刺破附睾 尾部上皮,用针头挤压出精子(图 2-1)。;2.5 体外受精
将成熟的COC 移入已经平衡 2h 的受精滴中(T6+20mg/mL),加入
适量体积的获能精子,使精子密度在 1×106 右,置于培养箱中孵育 8h, 观察原核形成和第二极体排出,计算受精率。
胚胎培养
洗去精子,将胚胎换液于无糖 CZB 继续培养。胚胎过阻断之后(4
-cell)换为含葡萄糖的 CZB,换液时间在有 1/3 的胚胎到达 4-cell 后进 行,大约在受精后 36h-48h 之间。在受精后 24h、48h、72h、96h 各观察
一次,记录 2-cell、4-cell、桑椹胚、囊胚的发育情况。
四、作业
计算本实验的受精率、卵裂率和囊胚发育率。
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