第1章细菌检验技术2.ppt

第二节 细菌的培养与分离技术 细菌的生理 细菌的理化性状 一、细菌的化学组成 二、细菌的物理性状 细菌的营养与生长繁殖 一、细菌的营养物质 为细菌的新陈代谢及生长繁殖提供必要的原料和能量 二、影响细菌生长的因素 细菌生长繁殖的必备条件 酸碱度（pH） 每种细菌都有一个可生长的pH范围,以及最适生长pH 多数病原菌的最适pH为（pH7.2~7.6），在宿主体内极易生存 霍乱弧菌在pH8.4~9.2生长最好 结核杆菌生长的最适pH为6.5~6.8 温 度 嗜冷菌——最适生长温度为10~20℃ 嗜热菌——最适生长温度50~60℃ 嗜温菌——最适生长温度20~40℃ 多数病原菌最适生长温度为人的体温，即37℃ 氧气： 专性需氧菌 具完善的呼吸酶系统，需用分子氧作为受氢体以完成需氧呼吸（结核分枝杆菌） 微需氧菌 在低氧压（5%~6%）时生长良好，氧气浓度>10%时可抑制其生长（幽门螺杆菌） 兼性厌氧菌 兼有有氧呼吸和无氧发酵二种能力，大多数病原菌属此类 专性厌氧菌 缺乏完善的呼吸酶，只能在低氧分压或无氧环境下发酵。有游离氧时，会受毒害，导致细菌死亡 1、缺乏氧化还原电势(Eh)高的呼吸酶 细胞色素和细胞色素氧化酶 2、缺乏分解有毒氧基团的酶 超氧化物歧化酶、触酶、过氧化物酶等 四、细菌的生长繁殖 1、细菌繁殖方式 二分裂繁殖速度: 一般20~30分钟分裂一代（结核杆菌18~20小时） 2、细菌群体生长繁殖 生长曲线 细菌的新陈代谢 细菌的新陈代谢包括分解代谢与合成代谢 营养物质分解和转化为能量的过程：分解代谢 所产生的能量用于细胞组分的合成：合成代谢 显著特点： 代谢旺盛和代谢类型多样化 单糖发酵试验 培养基：含不同单糖的蛋白胨水 指示剂-溴甲酚紫 内置一小倒管（观察有无气体产生） 硫化氢（H2S）试验 培养基：含有胱氨酸及醋酸铅（或硫酸亚铁）的培养基 原理：凡能分解含S氨基酸细菌，可产生H2S，与铅/铁离子结合后产生黑色沉淀 结果判断： 有黑色沉淀：H2S（+） 无黑色沉淀：H2S（-） 细菌在代谢过程中，除合成自身的菌体成分外，也可合成一些在医学上有重要意义的物质——合成代谢产物 细菌合成代谢产物 热原质 毒素与侵袭性酶 色素 抗生素 细菌素 维生素 ② 毒素和侵袭性酶 细菌致病中重要物质 毒素——外毒素 exotoxin  内毒素 endotoxin　　　　（二者区别在致病性章中详述） 侵袭性酶——细菌在机体内生长时产生的，有利于细菌侵袭和扩散的酶，如透明质酸酶、卵磷脂酶等 细菌的物理性状 细菌主要分解代谢产物及生化反应的意义 细菌合成代谢产物及在医学中的作用 细菌生长繁殖的条件 细菌群体生长繁殖曲线及分期 第二节 细菌的培养与分离技术p8 一、培养基 培养基 （culture medium） 是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品 3、凝固物质： 琼脂、明胶、卵白 4、抑制剂： 胆盐、煌绿、亚硫酸钠及一些染料和某些抗生素 选择培养基 基础培养基+化学物质/抗生素 如：SS、MAC 鉴别培养基 基础培养基+特定底物+指示剂 如糖发酵管、葡萄糖蛋白胨水、双糖铁培养基等 特殊培养基（厌氧培养基） 如庖肉培养基等 营养丰富，含有特殊生长因子，加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势 按物理性状分类： 液体培养基 半固体培养基（0.3%~0.5%琼脂） 固体培养基（1.5%~2.0%琼脂） 二、细菌的人工培养 无菌技术！ 在固体培养基中生长情况 分离培养: 将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开 黏液型菌落 （M型菌落） 病原菌的分离培养→菌落 大小 形态 颜色 表面性状 透明度 边缘 溶血性 气味 （五）培养基的选择 血琼脂平板 巧克力色琼脂平板 肠道选择培养基 血液增菌培养基 碱性琼脂、TCBS琼脂 人工培养细菌的用途 感染性疾病的诊断与防治 细菌的鉴定和研究 生物制品的制备 第三节细菌的生物化学鉴定技术 细菌鉴定 培养特征 形态染色 生化反应 免疫学方法（血清学鉴定） 分子生物学方法 第四节 细菌非培养检验技术 免疫学检验技术 分子生物学检验技术 细菌毒素检验技术 降钙素原检验技术 动物实验 一、免疫学检验技术 抗原检测——明确诊断 抗体检测——辅助诊断 对流免疫电泳 免疫印迹试验等 可用于临床标本细菌的鉴定 核酸杂交： DNA可进行变性、复性、杂交。利用这一特性，制备特定序列DNA片段，进行标记后用作探针，在一定条件下，按照碱基互补配对原则与标本中已变性的细菌DNA进行杂交，通过检测杂交信