3.细菌的生化反应.ppt

3、质控菌：阳性菌株：B群链球菌；阴性菌株：其它群链球菌。 4、意义：主要用于B群链球菌和其它群链球菌的鉴别。 5、注意：每次最好能以阴、阳性菌株做对照。 硝酸盐还原试验 1、原理：硝酸盐还原反应包括两个过程。其一是在合成代谢中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮物质；另一是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。 硝酸盐还原的过程可因细菌种类的不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希氏菌等；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌可使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如沙雷氏菌属；有的细菌还可以将其还原产物在合成代谢中完全利用。硝酸盐或亚硝酸盐如果还原生成气体的终末代谢产物如氮或氧化氮，称为脱硝化作用。 2、试剂：甲液：对氨基苯磺酸 0.8g；5N醋酸100ml。 乙液：α-萘胺0.5g；5N醋酸100ml。 用时将甲液和乙液等量混合。 3、方法和结果：接种待检菌于硝酸盐培养基上，培养1～4天，加入硝酸盐试剂0.1ml,观察结果。立即或于10分钟显红色者为阳性。如欲观察有无氮气产生，可于培养基内加一只小倒管，若有气泡产生，则表示有氮气生成。 4、注意：本试验的阴性反应有三种原因：一为细菌不能还原硝酸盐；二为亚硝酸盐继续分解生成氨和氮；三为培养基不适于细菌生长。 如欲检查培养基中硝酸盐是否被还原，可取锌粉少许加入培养基内，如出现红色，表示硝酸盐仍存在；如不出现红色，表明硝酸盐已被分解。 5、质控菌： 阳性菌株：大肠埃希氏菌； 阴性菌株：醋酸钙不动杆菌。 6、应用：用于非发酵菌群的分类鉴定。 碱性磷酸酶试验 1、原理：磷酸酶是一种磷酸单脂酶，他作用于磷酸单脂，使磷酸单脂水解，氧和磷之间的健断裂（C—O—P），无机磷酸盐从磷酸单脂中释放出来。由于该酶在碱性条件下具有最适催化活性，故称碱性磷酸酶。 当把能产生碱性磷酸酶的细菌的菌悬液与无色的对—硝基苯磷酸盐溶液混合，后者受碱性磷酸酶的作用裂解生成无机磷酸盐和黄色的对—硝基苯酚。从而使溶液变黄。 2、试剂： （1）、0.1% 对—硝基苯磷酸盐水溶液。 （2）、0.025M Tris 缓冲液（pH8.0）。 3、方法与结果（方法一）： （1）、用无菌棉拭子取试验菌的菌落，用Tris 缓冲液（pH8.0）稀释，比浊，使其浊度相当于9×108细菌/ml（相当于麦氏比浊管第三管）。 （2）、取上述菌悬液0.5ml加入一无菌试管中，然后加入0.5ml 0.1% 对—硝基苯磷酸盐水溶液，置37℃水浴种1小时，观察结果。若菌液颜色由无色变为黄色，即为阳性反应。 （方法二） 将待测菌种点种在加有硝基酚 磷酸盐的pH5.6～6.8MH琼脂上， 孵育18～24h，菌落周围出现黄 色为阳性。 吡咯烷酮芳基酰胺酶（PYR）试验 1、原理：细菌产生吡咯烷酮芳基酰胺酶，水解L-吡咯烷酮β-萘酚酰胺（PYR）基质，释放出β-萘酚酰胺。后者与试剂N,N-二甲氨基肉桂醛反应，产生桃红色颜色反应为阳性。 2、培养基：称取相当于1000ml容量Todd Hewitt培养基干粉（用于B群链球菌β-溶血素制备中金黄色葡萄球菌的培养），加琼脂15g，高压灭菌备用。 称取PYR400mg，溶于4ml甲醇，无菌过滤后，加入前项培养基中，倾注成平板。 3、PYR产色试剂：1g N,N-二甲氨基肉桂醛溶于含25mmol/L TritonX-10的50ml 10%的浓盐酸中。 4、方法及结果：将被检菌株接种上述试验平板上，35——37℃过夜培养后，加入一滴PYR试剂于菌落上，1min后，菌落出现桃红色为阳性；若菌落为黄褐色为阴性。 5、质控菌：阳性菌株：金黄色葡萄球菌； 阴性菌株：表皮葡萄球菌。 6、意义：用于葡萄球菌属的种间鉴别。 2、培养基和试剂： 培养基：葡萄糖酸盐蛋白胨肉汤 蛋白胨 1.5g 酵母浸膏 1g 磷酸氢二钾 1g 葡萄糖酸钾 40g 蒸馏水 1000ml 上述成分加热溶解、过滤，每支试管分装2ml；15磅15分钟高压灭菌后备用。 试剂：班氏（Benedict）硫酸铜试剂。 3、方法和结果： 直接加1ml班氏（Benedict）硫酸铜试剂于经18～24小时培养的葡盐菌液中，充分摇匀，置沸水浴中10分钟，试管中产生棕红色沉淀者为阳性。 4、质控菌：阳性菌株：产气肠杆菌； 阴性菌株：大肠埃希氏菌。 5、意义：用于肠杆菌科的初步分群。 第四节 呼吸酶类及其它酶类试验 一、氧化酶试验 （Kovac氏法） 1、原理：氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞色素