园艺植物组织培养 组培基本操作技术 植物组培快繁技术中的关键环节.docx

案例名称：植物组培快繁技术中的关键环节 案例：植物组培快繁过程中，每一个环节都对苗木生产的数量、质量起制约作用。无论是污染的控制，培养基及培养条件，移栽及管理等，哪一个环节出现问题都将造成生产成本的提高，经济效益下降。 问题：植物组培快繁技术中的关键环节有哪些呢？ 一、母液的配制 1.药品的称量 在称量药品前，对所配制母液所需的药品一一进行核对。称量要准确，避免漏称和重复。否则将造成大批试管苗生长不良，如无机营养元素母液配制出现错误，将导致草莓分化苗基部变红，分化和生长停滞；激素类出现错误。可导致分化苗不分化或愈伤组织大量产生等。 电子分析天平称量微量元素 电子分析天平称量微量元素 电子天平称量大量元素 2.铁盐的配制 通常以FeS04与Na2-EDTA混合配制成螯合剂。在配制的过程中两者要分别用蒸馏水溶解后混合。溶解Na2-EDTA可适当加热。充分搅拌直至全部溶解，而后将其缓慢倒人FeSO4溶液中，边倒边充分搅拌，然后定容。配制好后，待其自然冷却后，置于冰箱中保存。 3.母液的保存 配制好的母液应存放在2-4℃冰箱内，短期内用完，保存期不应超过1个月，在存放过程中出现混浊、沉淀、结晶、污染等现象，要立即倒掉重配。 二、 培养基的配制 1.母液的量取 首先要核对各种母液是否与培养基配方要求一致，并计算好所需各种母液的量。避免因母液量取错误。影响组培苗的分化与生长。 移取母液 移取母液 2. 配方 由于不同树种、不同品种，以及同一品种的不同部位对营养成分及激素需求不同；同一品种试管苗的分化与生根培养基成分不同，因此在配制培养基时要根据品种、目的来配制，否则将导致要求分化而不分化，要求生根而不生根的现象发生。 3.培养基硬度 培养基硬度过高，不利于外植体的插人，甚至会使培养基破碎，既浪费琼脂，又影响转接速度及苗体对养分的吸收；硬度过低，在容器内会滑动甚至破碎，转接的分化苗易倒伏。因此在配制培养基时要认真计算称取琼脂的用量，对新购进的琼脂要先进行试验，选择最适宜的用量。 培养基硬度要适宜 培养基硬度要适宜 三、培养基灭菌 由于培养基所含营养成分，即是植物所需的也是细菌和真菌生长所需要的，而且细菌和霉菌生长速度远高于植物细胞生长速度，其产生的毒素将导致培养 物的死亡。培养基带菌将导致整批组培苗污染，因此培养基灭菌是组培快繁过程中最关键的环节。 1.灭茵器的灵敏性及安全性 经常检查灭菌器各部件如安全阀、压力表等是否灵敏，锅体密封性是否良好，年限较长的灭菌器各部位是否有损坏、漏气、漏水现象等。 2.容器及封口材料 盛装培养基的容器及封口材料，是否带菌也将对培养基灭菌效果产生影响，使用前玻璃制品置于烘箱内消毒，一般用120℃ 2小时。封口材料放在灭菌器内，在121℃， 1.1kg∕cm2条件下灭菌15-20min。 无菌培养容器封口膜 无菌培养容器封口膜 3.严格控制温度、压力、时间 增压前待压力达0.5kg∕cm2时，打开放气阀排尽冷空气，否则会因为尚有冷空气存在，或蒸汽不能到达各部分而影响灭菌效果。灭菌过程中温度要控制在121℃ ，压力在1.1Kg∕cm2，时间在15-20min，不能超过此范围，否则培养基中某些激素、有机物等就会分解，培养基pH值会降低，不易凝固，影响试管苗分化和生长；若低于此范围灭菌不彻底，培养基带菌，一般在灭菌后3-4天培养基中细菌开始大量繁殖，1周后产生菌液逐渐布满培养基表面，接种材料也逐渐死亡。此外经过消毒的培养基通常置于10℃下保存，一般在2周内用完，含有IAA或赤霉素的要在1周内用完。 四、转接 1.接种过程的污染控制 接种要求在无菌环境中进行，接种室定期进行消毒灭菌，接种前打开紫外灯杀菌20min再开启工作台，开机15min后用75％酒精擦工作台，而后将接种工具如剪子、镊子等在酒精灯上烧10-20s消毒，待凉后备用；接种过程中接种工具不能离开工作台，或触及其它物体。转接前要检查欲转接试管苗是否已污染，避免造成交叉感染，并要核对培养基是否正确。 2.转接方法 根据不同品种和不同需要，如继代增殖、培养生根苗等，采用切取单芽茎段、单株苗及芽丛等不同方法转接。如在繁殖新品种草莓时，即可以剪取单株小苗，将其3-4株为一丛扦插在一起，也可采用剪取芽丛的方法加快繁殖速度；转接树莓时，采用剪取茎段与芽丛相结合的方法争取数量；葡萄微扦插繁殖时剪取带有一叶一芽茎段。 单株小苗转接 单株小苗转接 单芽茎段转接 五、试管苗的培养 培养室温度一般控制在25℃±1℃ ，光照1500-2500lx，10-12 h∕d。温度过高或过低试管苗的分化和生长都将被抑制，如草莓在温度30℃ 持续时间达1周以上时表现停长，叶片皱缩，节间不伸长，低于12℃ 时间