发酵学第章生产菌种的培养与保藏.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * 3、固体曲保藏法 采用麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为产孢子培养基，使菌种产生大量的休眠体（孢子）后，在室温或低温加以保存。 应用范围：适用于产孢子的真菌 要点：控制适当的水分 4、沙土管保藏法 先将砂与土分别洗净、烘干、过筛，按一定比例混匀，分装于小试管中，砂土的高度约1cm，以121℃蒸汽灭菌1～1.5h，间歇灭菌3次。50℃烘干并经无菌检查后备用。需要保藏的菌株先用斜面培养基充分培养，再以无菌水制成108～1010个/ml菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约2～4h，封口后置于干燥器中，在室温或4℃冰箱内保藏。 特点：保藏期较长、效果较好，且微生物移接方便，经济简便。它比石蜡油封藏法的保藏期长，约1～10年。 5、冷冻干燥法 用保护剂（脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等）制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。 应用范围：适用于除不产孢子的丝状真菌之外的其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等 优点：保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低 缺点：该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需冻干机 6、液氮超低温保藏法 是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-196℃）下保藏的方法。其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。 应用范围：适用于各种微生物菌种的保藏 优点：操作简便、高效、保藏期一般可达到15年以上；可使用各种培养形式的微生物进行保藏 （孢子或菌体、液体或固体） 缺点：超低温液氮设备，且液氮消耗较多，操作费用较高 （三）菌种保藏的注意事项 1、菌种在保藏前所处的状态 绝大多数微生物的菌种均保藏其休眠体。 2、菌种保藏所用的基质 斜面低温保藏：碳源应少些、营养成分应贫乏 砂土管保藏：砂和土要充分洗净 冷冻干燥：应注意保护剂 3、操作过程对细胞结构的损害 二、菌种的复壮 菌种复壮：使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性。 菌种衰退：生产上使用的菌种，在使用和保藏过程中，逐渐向不利于生产的方向发展变化，这种变化称之为菌种衰退。 1. 纯种分离法 通过纯种分离,可将衰退菌种细胞群体中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来,经扩大培养,就可恢复原菌株的典型性状。 采用稀释平板法、涂布平板法、平板划线法等方法获得单菌落。 2.淘汰法 将衰退菌种进行一定的处理（如药物，低温、高温等），往往可以起到淘汰已衰退个体而达到复壮的目的。 3.选择合适的培养条件 将保藏后的菌种接种在保藏前所使用的同一培养基上，有利于原有性状的恢复。 （1） ATCC American Type Culture Collection. Rockvil1．Maryland.U.S.A。 美国标准菌种收藏所，美国，马里兰洲，罗克维尔市。 （2） CSH〔 （Cold Spring Harbor Laboratory），U.S.A 冷泉港研究室，美国。 （3） IAM （Institute of Applied Microbiology），University of Tokyo，Japan。 日本东京大学应用微生物研究所，日本东京。 （4） IFO （Institute for Fermentation）， Osaka，Japan。 发酵研究所，日本大阪。 （5） KCC （Kaken Chemical Company Ltd）， Tokyo，Japan。 科研化学有限公司，日本东京。 附：国内外主要菌种保藏机构介绍 CGMCC 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（China General Microbiological Culture Collection Center）成立于1979年，是以提供专业技术服务为主的公益性机构，1995年获得布达佩斯条约国际保藏中心的资格，是我国唯一同时提供一般菌种资源服务和专利生物材料保存的国家级保藏中心。中心设立在中国科学院微生物研究所。 ACCC 农业微生物菌种保藏管理中心； 中国农业科学院土壤肥料研究所， CICC 工业微生物菌种保臧管理中心； 轻工业部食品发酵工业科学研究所，北京。 概念和思考题 种子制备 孢子进罐法 一级种子 二级种子 二级发酵 种龄 接种量 菌丝结团 菌丝粘壁 菌种衰