缺血预处理大鼠心肌细胞中的bcl蛋白对线粒体通透性转.pptxVIP

背 景; 线粒体通透性转换孔（MPTP）是位于线粒体内外膜间由多个蛋白质组成的复合孔道，又称线粒体大通道，是线粒体内外信息交流的中心枢纽，功能的发挥依赖于其开放状态。根据细胞环境的不同，MPTP可有3种开放状态，一种是完全关闭状态，一种是可逆性的低水平开放状态，另一种是不可逆的高水平开放状态。MPTP高水平开放的直接效应是导致线粒体质子－电化学梯度耗散、离子稳态打破、线粒体肿胀和ATP水解，这些效应最终激发细胞死亡。细胞色素C等凋亡效应因子从线粒体释放是MPTP调控细胞凋亡的关键。 ; Bcl-2家族蛋白是在细胞凋亡过程中起关键性作用的一类蛋白质。在线粒体上，Bcl-2家族蛋白通过与其他凋亡蛋白的协同作用，调控线粒体结构与功能的稳定性，发挥着细胞凋亡“主开关”的作用。Bcl-2家族包括两类蛋白质：一类是抗凋亡蛋白，另一类是促凋亡蛋白。平时被隔离在线粒体等细胞器内的该家族的抗凋亡蛋白成员（如Bcl-2蛋白）则抑制细胞色素C和凋亡诱导因子等促凋亡因子的释放，具有抑制细胞凋亡的功能。 ; 由于两者都是通过引起细胞色素C等物质浓度的改变来发挥作用，但是这两者之间是否存在直接联系尚不清楚。本实验旨在于研究Bcl-2蛋白是否会对MPTP的开放情况产生影响。 ;实 验 设 计;材 料;方 法;2.将实验动物分为三组： 正常对照组：穿线但不做结扎处理，持续灌流。 缺血再灌组：结扎30min，再灌注20min。 缺血预处理组：连续3次停灌3min+复灌 5min，然后 缺血30min，再灌注20min。 ;3.Bcl-2蛋白含量的测定 取心尖以上缺血梗死区横切2mm厚心肌，用免疫组化sp法测定心肌Bcl-2的含量 ;5. MPTP开放程度的检测 线粒体蛋白含量的测定：线粒体悬液用考马斯亮蓝法进行蛋白含量测定，以1mg/ml的BSA作为标准品。线粒体悬液的吸光度：根据蛋白定量的结果用肿胀液将线粒体混悬液稀释为0.25mg/ml。在线粒体悬液中加200μmol/ml的 CaCl2，测定加入CaCl2前后A520吸光度的变化，每隔30s进行一次，连续观察15min。以到达平衡后的吸光度变化ΔS作为MPTP开放程度的指标。 ;预 期 实 验 结 果;Thank you !; 线粒体通透性转换孔（MPTP）是位于???粒体内外膜间由多个蛋白质组成的复合孔道，又称线粒体大通道，是线粒体内外信息交流的中心枢纽，功能的发挥依赖于其开放状态。根据细胞环境的不同，MPTP可有3种开放状态，一种是完全关闭状态，一种是可逆性的低水平开放状态，另一种是不可逆的高水平开放状态。MPTP高水平开放的直接效应是导致线粒体质子－电化学梯度耗散、离子稳态打破、线粒体肿胀和ATP水解，这些效应最终激发细胞死亡。细胞色素C等凋亡效应因子从线粒体释放是MPTP调控细胞凋亡的关键。 ;实 验 设 计;方 法